प्रोटीनुरिया (प्रोटीनुरिया) - मूत्र में सांद्रता में प्रोटीन की उपस्थिति जो इसे गुणात्मक तरीकों से पहचानना संभव बनाती है।

अंतर करना

• गुर्दे की प्रोटीनमेह और
• एक्स्ट्रारेनल (पोस्टरेनल) प्रोटीनुरिया

गुर्दे का प्रोटीनमेह

वृक्क प्रोटीनमेह ग्लोमेरुलर फिल्टर को नुकसान या घुमावदार नलिकाओं के उपकला की शिथिलता के कारण होता है।

चयनात्मक और गैर-चयनात्मक प्रोटीनुरिया के बीच भेद:कुछ प्लाज्मा और मूत्र प्रोटीन, उनके आणविक भार और आवेश के अनुपात के आधार पर।

चयनात्मक प्रोटीनमेह

चयनात्मक प्रोटीनमेह ग्लोमेरुलर फिल्टर के न्यूनतम (अक्सर प्रतिवर्ती) उल्लंघन के साथ होता है, जो कम आणविक भार प्रोटीन (आणविक भार 68,000 से अधिक नहीं) द्वारा दर्शाया जाता है - एल्ब्यूमिन, सेरुलोप्लास्मिन, ट्रांसफ़रिन।

गैर-चयनात्मक प्रोटीनमेह

गैर-चयनात्मक प्रोटीनुरिया अधिक गंभीर फिल्टर क्षति के साथ अधिक आम है, जब बड़े आणविक प्रोटीन खोना शुरू हो जाते हैं। प्रोटीनुरिया की चयनात्मकता एक महत्वपूर्ण नैदानिक ​​​​और रोगसूचक विशेषता है।

गुर्दे का प्रोटीनमेह हो सकता है:

• जैविक और
• कार्यात्मक (शारीरिक)।

ऑर्गेनिक रीनल प्रोटीनुरिया

कार्बनिक गुर्दे प्रोटीनमेह नेफ्रॉन को कार्बनिक क्षति के साथ होता है। घटना के प्रमुख तंत्र के आधार पर, कुछ प्रकार के कार्बनिक प्रोटीनुरिया को प्रतिष्ठित किया जा सकता है।

ग्लोमेरुलर प्रोटीनुरिया

ग्लोमेरुलर प्रोटीनुरिया - ग्लोमेरुलर फिल्टर को नुकसान के कारण, ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस और चयापचय या संवहनी रोगों से जुड़े नेफ्रोपैथी के साथ होता है। (ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस, उच्च रक्तचाप, संक्रामक और एलर्जी कारक, हृदय की क्षति)

ट्यूबलर प्रोटीनमेह

ट्यूबलर प्रोटीनुरिया - एक अपरिवर्तित ग्लोमेरुलर फिल्टर के माध्यम से पारित प्लाज्मा कम आणविक भार प्रोटीन को पुन: अवशोषित करने के लिए नलिकाओं की अक्षमता से जुड़ा हुआ है। (एमाइलॉयडोसिस, एक्यूट ट्यूबलर नेक्रोसिस, इंटरस्टीशियल नेफ्रैटिस, फैंकोनी सिंड्रोम)

प्रीरेनल प्रोटीनुरिया

प्रीरेनल प्रोटीनुरिया (अत्यधिक) - कम आणविक भार प्रोटीन की असामान्य रूप से उच्च प्लाज्मा सांद्रता की उपस्थिति में विकसित होता है, जिसे सामान्य ग्लोमेरुली द्वारा पुन: अवशोषित करने के लिए नलिकाओं की शारीरिक क्षमता से अधिक मात्रा में फ़िल्टर किया जाता है। (मल्टीपल मायलोमा, मसल टिश्यू नेक्रोसिस, एरिथ्रोसाइट हेमोलिसिस)

कार्यात्मक गुर्दे प्रोटीनमेह

कार्यात्मक गुर्दे प्रोटीनमेह गुर्दे की बीमारी से जुड़ा नहीं है और उपचार की आवश्यकता नहीं है।

कार्यात्मक प्रोटीनमेह में शामिल हैं:

• मार्चिंग,
• भावुक
• सर्दी,
• नशा,
• ऑर्थोस्टेटिक (केवल बच्चों में और केवल खड़े होने की स्थिति में)।

एक्स्ट्रारेनल (पोस्टरेनल) प्रोटीनुरिया

एक्सट्रैरेनल (पोस्टरेनल) प्रोटीनुरिया के साथ, प्रोटीन मूत्र और जननांग पथ से मूत्र में प्रवेश कर सकता है (कोल्पाइटिस और योनिशोथ के साथ - अनुचित तरीके से एकत्र किए गए मूत्र के साथ)। इस मामले में, यह भड़काऊ एक्सयूडेट के मिश्रण से ज्यादा कुछ नहीं है।

एक्स्ट्रारेनल प्रोटीनुरिया आमतौर पर 1 ग्राम / दिन से अधिक नहीं होता है और अक्सर क्षणिक होता है।

एक्सट्रारेनल प्रोटीनुरिया के निदान में तीन कप परीक्षण और मूत्र संबंधी जांच से मदद मिलती है।

पोस्टरेनल प्रोटीनुरिया सिस्टिटिस, मूत्रमार्ग के साथ होता है।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के तरीके

प्रोटीन की उपस्थिति पर अध्ययन करने के लिए एक पूर्वापेक्षा मूत्र की पूर्ण पारदर्शिता है।

गुणवत्ता के नमूने

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ नमूना

फ़िल्टर्ड मूत्र के 3-4 मिलीलीटर को दो परखनली में डाला जाता है। एक प्रयोगात्मक परखनली में सल्फ़ोसैलिसिलिक एसिड के 20% घोल की 6-8 बूँदें डालें। दूसरी ट्यूब नियंत्रण है। एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर, नियंत्रण ट्यूब की प्रयोगात्मक एक के साथ तुलना करें। मूत्र के नमूनों में प्रोटीन की उपस्थिति में, एक ओपेलेसेंट मैलापन प्रकट होता है।

परिणाम निम्नानुसार दर्शाया गया है:

• प्रतिक्रिया कमजोर सकारात्मक है (+),
• सकारात्मक (++),
• तेजी से सकारात्मक (+++)।

नमूना अत्यधिक संवेदनशील है।

आप एक शुष्क परीक्षण का भी उपयोग कर सकते हैं, जब सल्फोसैलिसिलिक एसिड के कुछ क्रिस्टल या इस एसिड के घोल से पहले से भिगोया हुआ एक फिल्टर पेपर कई मिलीलीटर मूत्र में मिलाया जाता है।

झूठे सकारात्मक परिणामआयोडीन की तैयारी, सल्फा दवाओं, पेनिसिलिन की बड़ी खुराक और मूत्र में यूरिक एसिड की उच्च सांद्रता की उपस्थिति के कारण हो सकता है।

नाइट्रिक एसिड टेस्ट (गेलर टेस्ट)

नाइट्रिक एसिड के 50% घोल के 1-2 मिली को एक परखनली में डाला जाता है, फिर एसिड पर उतनी ही मात्रा में मूत्र डाला जाता है। प्रोटीन की उपस्थिति में दो द्रवों के बीच अंतरापृष्ठ पर एक सफेद वलय दिखाई देता है। कभी-कभी लाल-बैंगनी रंग का वलय तरल पदार्थों के बीच की सीमा से थोड़ा ऊपर पेशाब की उपस्थिति से बनता है। यूरेट वलय, प्रोटीन वलय के विपरीत, हल्का सा गर्म करने पर घुल जाता है।

उज्ज्वल नमूना

ब्राइट बॉयल टेस्ट और प्रोटीनुरिया स्क्रीनिंग टेस्ट (शुष्क वर्णमिति नमूने) के लिए वस्तुतः किसी अभिकर्मक की आवश्यकता नहीं होती है।

जब प्रोटीन युक्त मूत्र को उबाला जाता है, तो यह विकृत हो जाता है, एक बादल का अवक्षेप या गुच्छे बनते हैं जो फॉस्फेट लवण के विपरीत 6% एसिटिक एसिड में नहीं घुलते हैं। स्क्रीनिंग टेस्ट एक संकेतक (आमतौर पर ब्रोमोफेनॉल नीला) और एक बफर के साथ लेपित कागज के रंग को बदलने के लिए एक प्रोटीन (एल्ब्यूमिन) की क्षमता पर आधारित होते हैं। संकेतक पेपर की रंग तीव्रता (अल्बुफ़ान, एल्ब्युटेस्ट - चेक गणराज्य; लैबस्टिक्स, मल्टीस्टिक्स - यूएसए; कॉम्बर्टेस्ट - जर्मनी) और प्रोटीन की मात्रा के बीच एक सीधा संबंध प्रोटीनूरिया की मात्रा का मोटे तौर पर अनुमान लगाना संभव बनाता है। हालांकि, वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले स्क्रीनिंग परीक्षण कमियों के बिना नहीं हैं। विशेष रूप से, ब्रोमोफेनॉल नीला बेंस-जोन्स प्रोटीन का पता नहीं लगाता है।

मात्रात्मक विधियां

ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि

विधि नाइट्रिक एसिड के साथ गुणात्मक नमूने पर आधारित है। परीक्षण का कोर्स ऊपर वर्णित है। लेयरिंग के बाद दूसरे और तीसरे मिनट के बीच दो तरल पदार्थों की सीमा पर एक पतली अंगूठी की उपस्थिति मूत्र में प्रोटीन के 0.033 ग्राम / एल की उपस्थिति को इंगित करती है (मूत्र में प्रोटीन एकाग्रता आमतौर पर पीपीएम में व्यक्त की जाती है, यानी, प्रति लीटर ग्राम में) ) यदि अंगूठी 2 मिनट से पहले दिखाई देती है, तो मूत्र को पानी से पतला कर देना चाहिए। मूत्र के इस तरह के कमजोर पड़ने का चयन किया जाता है ताकि जब इसे नाइट्रिक एसिड पर लेटा जाए, तो 2-3 वें मिनट में अंगूठी दिखाई दे। कमजोर पड़ने की डिग्री रिंग की चौड़ाई और कॉम्पैक्टनेस और इसकी उपस्थिति के समय पर निर्भर करती है।

प्रोटीन सांद्रता की गणना मूत्र के कमजोर पड़ने की डिग्री (तालिका 8) से 0.033 ग्राम/ली गुणा करके की जाती है।

रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव कमजोर पड़ने की विधि के कई नुकसान हैं: यह व्यक्तिपरक, समय लेने वाली है, मूत्र के पतला होने पर प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण करने की सटीकता कम हो जाती है।

सबसे सुविधाजनक और सटीक नेफेलोमेट्रिक और बाय्यूरेट विधियां हैं।

नेफेलोमेट्रिक विधि

यह सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ मैलापन देने के लिए प्रोटीन की संपत्ति पर आधारित है, जिसकी तीव्रता प्रोटीन की एकाग्रता के समानुपाती होती है। फ़िल्टर किए गए मूत्र के 1.25 मिलीलीटर को स्नातक की उपाधि प्राप्त टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और सल्फोसैलिसिलिक एसिड का 3% घोल 5 मिलीलीटर की मात्रा में मिलाया जाता है, अच्छी तरह मिलाया जाता है। 5 मिनट के बाद, विलुप्त होने को FEK-M (या किसी अन्य फोटोमीटर) पर 590-650 एनएम (नारंगी या लाल बत्ती फिल्टर) के तरंग दैर्ध्य पर 0.5 सेमी की परत मोटाई के साथ एक क्यूवेट में नियंत्रण के खिलाफ मापा जाता है। नियंत्रण के लिए , फ़िल्टर किए गए मूत्र के 1.25 मिलीलीटर (वही) का उपयोग किया जाता है, जिसमें 5 मिलीलीटर की मात्रा में एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है।

प्रोटीन एकाग्रता पर विलुप्त होने के मूल्य के आधार पर एक अंशांकन वक्र प्रारंभिक रूप से बनाया गया है। विभिन्न प्रोटीन सांद्रता तैयार करने के लिए एल्बुमिन मानक समाधान (मानव या गोजातीय सीरम से) का उपयोग किया जाता है। वर्कशीट को पूरा करें।

ब्यूरेट विधि

यह कॉपर सल्फेट और कास्टिक क्षार के साथ एक वायलेट बायोरेट कॉम्प्लेक्स देने के लिए प्रोटीन की क्षमता पर आधारित है, जिसकी रंग तीव्रता प्रोटीन की मात्रा के सीधे आनुपातिक है। मूत्र के 2 मिलीलीटर में, प्रोटीन और अपकेंद्रित्र को अवक्षेपित करने के लिए 2 मिलीलीटर ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड समाधान मिलाएं। सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया जाता है। तलछट (प्रोटीन) में 4 मिली 3% NaOH घोल और 0.1 मिली 20% कॉपर सल्फेट घोल, हलचल और अपकेंद्रित्र मिलाएं। बैंगनी सतह पर तैरनेवाला 540 एनएम (हरा प्रकाश फिल्टर) की तरंग दैर्ध्य पर एक क्युवेट में आसुत जल के खिलाफ 1.0 सेमी की परत मोटाई के साथ फोटोमीटर किया जाता है। प्रोटीन एकाग्रता का निर्धारण अनुभवजन्य रूप से प्राप्त तालिका से किया जाता है (अंशांकन वक्र पिछले की तरह बनाया गया है तरीका)।

ऑर्थोस्टेटिक परीक्षण

संदिग्ध ऑर्थोस्टेटिक प्रोटीनुरिया और नेफ्रोप्टोसिस के लिए संकेत दिया गया। मूत्राशय को पूरी तरह से खाली करने के बाद, विषय 2 घंटे के लिए एक क्षैतिज स्थिति बनाए रखता है फिर, बिना उठे, वह मूत्र का एक (नियंत्रण) भाग पास करता है। अगले 2 घंटों में, विषय लगातार चलता रहता है, अधिकतम काठ का लॉर्डोसिस (पीठ के निचले हिस्से के पीछे एक छड़ी रखता है) की स्थिति को बनाए रखता है, जिसके बाद वह मूत्र के दूसरे भाग को पास करता है। मूत्र के दोनों भागों में, प्रोटीन की मात्रा और ग्राम में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित की जाती है, और नेफ्रोप्टोसिस के मामले में, 1 मिली में लाल रक्त कोशिकाओं की संख्या निर्धारित की जाती है। ऑर्थोस्टेटिक प्रोटीनुरिया के साथ, प्रोटीनुरिया या ग्राम में प्रारंभिक प्रोटीन सामग्री में 2-3 गुना वृद्धि दूसरी सर्विंग में पाई जाती है। हेमट्यूरिया की उपस्थिति, अक्सर दूसरे भाग में ट्रेस प्रोटीनुरिया के संयोजन में, नेफ्रोप्टोसिस की विशेषता है।

बेंस-जोन्स यूरोप्रोटीन का निर्धारण

बेंस-जोन्स प्रोटीन थर्मोलैबाइल कम आणविक भार पैराप्रोटीन (सापेक्ष आणविक भार 20,000-45,000) हैं जो मुख्य रूप से मल्टीपल मायलोमा और वाल्डेनस्ट्रॉम के मैक्रोग्लोबुलिनमिया में पाए जाते हैं। वे इम्युनोग्लोबुलिन की हल्की एल-श्रृंखला हैं। अपने छोटे आणविक भार के कारण, एल-श्रृंखला आसानी से रक्त से मूत्र में एक अक्षुण्ण गुर्दे फिल्टर के माध्यम से गुजरती है और थर्मोप्रेजर्वेशन प्रतिक्रिया का उपयोग करके वहां निर्धारित किया जा सकता है। अध्ययन केवल सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ सकारात्मक परीक्षण के साथ आयोजित करने की सलाह दी जाती है। परिभाषा निम्नानुसार की जाती है। मूत्र के 10 मिलीलीटर में, एसिटिक एसिड के 10% घोल की 3-4 बूंदें और संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल के 2 मिलीलीटर मिलाएं, धीरे-धीरे पानी के स्नान में गर्म करें, धीरे-धीरे तापमान बढ़ाएं। यदि मूत्र में बेंस-जोन्स प्रोटीन होते हैं, तो 45-60 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर विसरित मैलापन दिखाई देता है या घने सफेद अवक्षेप बनते हैं। उबालने के लिए और गर्म करने पर, अवक्षेप घुल जाता है, और ठंडा होने पर यह फिर से प्रकट होता है। यह नमूना पर्याप्त संवेदनशील नहीं है और इसे वैद्युतकणसंचलन और इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा जांचा जाना चाहिए।

26.02.2009

कुरिलक ओ.ए., पीएच.डी.

आम तौर पर, मूत्र में प्रोटीन अपेक्षाकृत कम मात्रा में उत्सर्जित होता है, आमतौर पर प्रति दिन 100-150 मिलीग्राम से अधिक नहीं।

एक स्वस्थ व्यक्ति में दैनिक डायरिया 1000-1500 मिली / दिन है; इस प्रकार, शारीरिक स्थितियों के तहत प्रोटीन एकाग्रता 8-10 मिलीग्राम/डीएल (0.08-0.1 ग्राम/ली) है।

मूत्र के कुल प्रोटीन को तीन मुख्य अंशों द्वारा दर्शाया जाता है - एल्ब्यूमिन, म्यूकोप्रोटीन और ग्लोब्युलिन।

मूत्र एल्ब्यूमिन सीरम एल्ब्यूमिन का वह भाग है जिसे ग्लोमेरुली में फ़िल्टर किया गया है और वृक्क नलिकाओं में पुन: अवशोषित नहीं किया गया है; सामान्य मूत्र एल्ब्यूमिन का उत्सर्जन 30 मिलीग्राम / दिन से कम है। मूत्र में प्रोटीन का एक अन्य मुख्य स्रोत वृक्क नलिकाएं हैं, विशेष रूप से नलिकाओं का दूरस्थ भाग। ये नलिकाएं कुल मूत्र प्रोटीन का दो-तिहाई स्रावित करती हैं; इस राशि का लगभग 50% टैम-हॉर्सफॉल ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा दर्शाया जाता है, जो डिस्टल नलिकाओं के उपकला द्वारा स्रावित होता है और मूत्र पथरी के निर्माण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। अन्य प्रोटीन मूत्र में ट्रेस मात्रा में मौजूद होते हैं और वृक्क फिल्टर-फ़िल्टर्ड कम आणविक भार प्लाज्मा प्रोटीन से उत्पन्न होते हैं जो वृक्क नलिकाओं, वृक्क ट्यूबलर एपिथेलियल माइक्रोग्लोबुलिन (आरटीई), और प्रोस्टेटिक और योनि स्राव में पुन: अवशोषित नहीं होते हैं।

प्रोटीनुरिया, यानी मूत्र में प्रोटीन की मात्रा में वृद्धि, गुर्दे की क्षति को दर्शाने वाले सबसे महत्वपूर्ण लक्षणों में से एक है। हालांकि, प्रोटीनूरिया के साथ कई अन्य स्थितियां भी हो सकती हैं। इसलिए, प्रोटीनुरिया के दो मुख्य समूह हैं: वृक्क (सच्चा) और एक्स्ट्रारेनल (झूठा) प्रोटीनमेह।

वृक्क प्रोटीनमेह में, ग्लोमेरुलर फिल्टर की पारगम्यता में वृद्धि के कारण प्रोटीन रक्त से सीधे मूत्र में प्रवेश करता है। गुर्दे की प्रोटीनमेह अक्सर ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस, नेफ्रोसिस, पायलोनेफ्राइटिस, नेफ्रोस्क्लेरोसिस, गुर्दे के अमाइलॉइडोसिस, नेफ्रोपैथी के विभिन्न रूपों, जैसे गर्भावस्था में नेफ्रोपैथी, बुखार, उच्च रक्तचाप आदि में पाया जाता है। स्वस्थ लोगों में भारी शारीरिक परिश्रम, हाइपोथर्मिया, मनोवैज्ञानिक तनाव के बाद भी प्रोटीनूरिया पाया जा सकता है। नवजात शिशुओं में, जीवन के पहले हफ्तों में शारीरिक प्रोटीनुरिया मनाया जाता है, और बच्चों और किशोरों में अस्टेनिया के साथ, 7-18 वर्ष की आयु में तेजी से विकास के साथ, ऑर्थोस्टेटिक प्रोटीनुरिया (शरीर की सीधी स्थिति में) संभव है।

झूठे (एक्स्ट्रारेनल) प्रोटीनुरिया के साथ, मूत्र में प्रोटीन का स्रोत ल्यूकोसाइट्स, एरिथ्रोसाइट्स और मूत्र पथ उपकला के यूरोटेलियल कोशिकाओं का एक मिश्रण है। इन तत्वों के टूटने, विशेष रूप से मूत्र की क्षारीय प्रतिक्रिया में उच्चारित, मूत्र में प्रोटीन के प्रवेश की ओर जाता है, जो पहले से ही गुर्दे के फिल्टर को पारित कर चुका है। विशेष रूप से उच्च स्तर की झूठी प्रोटीनमेह मूत्र में रक्त का एक मिश्रण देता है, प्रचुर मात्रा में हेमट्यूरिया के साथ यह 30 ग्राम / लीटर या अधिक तक पहुंच सकता है। रोग जो एक्स्ट्रारेनल प्रोटीनुरिया के साथ हो सकते हैं - यूरोलिथियासिस, किडनी तपेदिक, गुर्दे या मूत्र पथ के ट्यूमर, सिस्टिटिस, पाइलिटिस, प्रोस्टेटाइटिस, मूत्रमार्गशोथ, वल्वोवागिनाइटिस।

नैदानिक ​​वर्गीकरण में हल्के प्रोटीनमेह (0.5 ग्राम/दिन से कम), मध्यम (0.5 से 4 ग्राम/दिन), या गंभीर (4 ग्राम/दिन से अधिक) शामिल हैं।

तीव्र ग्लोमेरुलोनेफ्राइटिस या पायलोनेफ्राइटिस जैसे गुर्दे की बीमारी वाले अधिकांश रोगियों में हल्का प्रोटीनमेह होता है, लेकिन नेफ्रोटिक सिंड्रोम वाले रोगी आमतौर पर मूत्र में प्रतिदिन 4 ग्राम से अधिक प्रोटीन उत्सर्जित करते हैं।

प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए विधियों की एक विस्तृत श्रृंखला का उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से, एकीकृत ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि, बाय्यूरेट विधि, सल्फोसैलिसिलिक एसिड का उपयोग करने वाली विधि, Coomassie ब्लू डाई, पाइरोगॉल रेड डाई, आदि का उपयोग करने वाली विधियाँ।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए विभिन्न विधियों के उपयोग से मूत्र में प्रोटीन की सामान्य सामग्री की सीमा की व्याख्या में गंभीर भ्रम पैदा हो गया है। चूंकि प्रयोगशालाओं में सबसे अधिक बार 2 विधियों का उपयोग किया जाता है - सल्फोसैलिसिलिक एसिड और पाइरोगॉलोल लाल डाई के साथ, हम उनके लिए मानदंडों की सीमा की शुद्धता की समस्या पर विचार करेंगे। सामान्य मूत्र में सल्फोसैलिसिलिक विधि की स्थिति से, पाइरोगॉल विधि की स्थिति से प्रोटीन सामग्री 0.03 ग्राम / एल से अधिक नहीं होनी चाहिए - 0.1 ग्राम / एल! मतभेद तिगुना!

सल्फोसैलिसिलिक एसिड का उपयोग करते समय मूत्र में प्रोटीन की सांद्रता के मानदंड के निम्न मान निम्नलिखित बिंदुओं के कारण होते हैं:

• अंशांकन वक्र एल्ब्यूमिन के जलीय घोल पर बनाया गया है। इसकी संरचना में मूत्र पानी से बहुत अलग है: पीएच, लवण, कम आणविक भार यौगिक (क्रिएटिनिन, यूरिया, आदि)। नतीजतन, Altshuler, Rakov और Tkachev के अनुसार, मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने में त्रुटि 3 गुना या अधिक हो सकती है! वे। सही निर्धारण के परिणाम केवल तभी प्राप्त किए जा सकते हैं जब मूत्र में बहुत कम विशिष्ट गुरुत्व होता है और संरचना और पीएच में पानी के करीब होता है;
• अन्य प्रोटीनों की तुलना में एल्ब्यूमिन के लिए सल्फोसैलिसिलिक विधि की उच्च संवेदनशीलता (जबकि, जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, सामान्य मूत्र के नमूनों में एल्ब्यूमिन कुल मूत्र प्रोटीन के 30% से अधिक नहीं होता है);
• यदि मूत्र के पीएच को क्षारीय पक्ष में स्थानांतरित कर दिया जाता है, तो सल्फोसैलिसिलिक एसिड बेअसर हो जाता है, जो प्रोटीन निर्धारण के परिणामों को कम करके आंकने का कारण भी है;
• अवक्षेपों की अवसादन दर महत्वपूर्ण भिन्नता के अधीन है - कम प्रोटीन सांद्रता पर, वर्षा धीमी हो जाती है, और प्रतिक्रिया के शुरुआती पड़ाव से परिणाम को कम करके आंका जाता है;
• अवक्षेपण अभिक्रिया की दर अनिवार्य रूप से अभिक्रिया मिश्रण के मिश्रण पर निर्भर करती है। उच्च प्रोटीन सांद्रता में, ट्यूब के जोरदार झटकों से बड़े गुच्छे बन सकते हैं और उनका तेजी से निपटान हो सकता है।

विधि की उपरोक्त सभी विशेषताओं से मूत्र में निर्धारित प्रोटीन सांद्रता का एक महत्वपूर्ण कम आंकलन होता है। कम आंकने की डिग्री एक विशेष मूत्र के नमूने की संरचना पर अत्यधिक निर्भर है। चूंकि सल्फोसैलिसिलिक एसिड विधि कम प्रोटीन सांद्रता देती है, नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला निदान पर विदेशी संदर्भ पुस्तकों में दिए गए आंकड़ों की तुलना में 0.03 ग्राम / एल की इस विधि की सामान्य सीमा को भी लगभग तीन गुना कम करके आंका जाता है।

पश्चिमी देशों में प्रयोगशालाओं के विशाल बहुमत ने मूत्र में प्रोटीन की एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए सल्फोसैलिसिलिक विधि के उपयोग को छोड़ दिया है और इस उद्देश्य के लिए सक्रिय रूप से पाइरोगॉल विधि का उपयोग कर रहे हैं। मूत्र और अन्य जैविक तरल पदार्थों में प्रोटीन की सांद्रता का निर्धारण करने के लिए पाइरोगॉल विधि, पाइरोगॉल रेड डाई कॉम्प्लेक्स और सोडियम मोलिब्डेट कॉम्प्लेक्स के अणुओं के साथ प्रोटीन अणुओं के परस्पर क्रिया द्वारा गठित रंगीन कॉम्प्लेक्स के ऑप्टिकल घनत्व को मापने के फोटोमेट्रिक सिद्धांत पर आधारित है। पाइरोगॉलोल रेड-मोलिब्डेट कॉम्प्लेक्स)।

पाइरोगॉल विधि अधिक सटीक मूत्र प्रोटीन माप क्यों प्रदान करती है? सबसे पहले, प्रतिक्रिया मिश्रण में मूत्र के नमूने के अधिक कमजोर पड़ने के कारण। यदि सल्फोसैलिसिलिक विधि में मूत्र के नमूने / अभिकर्मक का अनुपात 1/3 है, तो पाइरोगॉल विधि में यह विधि प्रकार के आधार पर 1/12.5 से 1/60 तक हो सकता है, जो मूत्र संरचना के प्रभाव को काफी कम कर देता है। माप परिणाम। दूसरे, प्रतिक्रिया एक सक्सेनेट बफर में होती है, जो कि एक स्थिर पीएच पर होती है। और, अंत में, विधि का सिद्धांत, कोई कह सकता है, अधिक "पारदर्शी" है। सोडियम मोलिब्डेट और पाइरोगॉल रेड डाई एक प्रोटीन अणु के साथ एक कॉम्प्लेक्स बनाते हैं। यह इस तथ्य की ओर जाता है कि मुक्त अवस्था में डाई अणु, जो 600 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर प्रकाश को अवशोषित नहीं करते हैं, प्रोटीन के संयोजन में प्रकाश को अवशोषित करते हैं। इस प्रकार, हम प्रत्येक प्रोटीन अणु को डाई के साथ लेबल करते हैं, और इसके परिणामस्वरूप, हम पाते हैं कि 600 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर प्रतिक्रिया मिश्रण के ऑप्टिकल घनत्व में परिवर्तन स्पष्ट रूप से मूत्र में प्रोटीन एकाग्रता से संबंधित है। इसके अलावा, चूंकि विभिन्न प्रोटीन अंशों के लिए पायरोगैलोल लाल की आत्मीयता लगभग समान है, विधि आपको कुल मूत्र प्रोटीन निर्धारित करने की अनुमति देती है। इसलिए, मूत्र में प्रोटीन एकाग्रता के सामान्य मूल्यों की सीमा 0.1 ग्राम / एल है (यह नैदानिक ​​​​और प्रयोगशाला निदान के लिए सभी आधुनिक पश्चिमी दिशानिर्देशों में इंगित किया गया है, जिसमें "नैदानिक ​​​​गाइड टू लेबोरेटरी टेस्ट" शामिल है, जिसे एन। टिट्ज़ द्वारा संपादित किया गया है। ) . मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए पाइरोगॉलोल और सल्फोसैलिसिलिक विधियों की तुलनात्मक विशेषताएं तालिका 1 में प्रस्तुत की गई हैं।

अंत में, मैं एक बार फिर इस तथ्य पर ध्यान देना चाहूंगा कि जब प्रयोगशाला मूत्र में प्रोटीन के निर्धारण के लिए सल्फोसैलिसिलिक विधि से पाइरोगॉल विधि में स्विच करती है, तो सामान्य मूल्यों की सीमा काफी बढ़ जाती है (0.03 ग्राम / एल से 0.1 ग्राम तक) / एल!)। प्रयोगशाला के कर्मचारियों को निश्चित रूप से इस बारे में चिकित्सकों को सूचित करना चाहिए, क्योंकि। इस स्थिति में, प्रोटीनमेह का निदान तभी किया जा सकता है जब मूत्र में प्रोटीन की मात्रा 0.1 g/l से अधिक हो।

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मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के सभी तरीके रासायनिक या थर्मल एजेंटों के प्रभाव में प्रोटीन जमावट पर आधारित होते हैं। मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति में मैलापन दिखाई देता है, जिसकी मात्रा प्रोटीन की मात्रा पर निर्भर करती है।

ए) गुणवत्ता परीक्षणमूत्र में प्रोटीन का निर्धारण - अनिवार्य है।

1. नाइट्रिक एसिड के साथ नमूना- 50% नाइट्रिक एसिड समाधान के 1-2 मिलीलीटर के साथ एक परखनली में, ध्यान से मूत्र की समान मात्रा की परत लगाएं, तरल को हिलाने की कोशिश न करें। मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति के मामले में, दो तरल पदार्थों की सीमा पर एक सफेद अंगूठी दिखाई देती है, जो एक काले रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ बेहतर दिखाई देती है।

2. सल्फासैलिसिलिक एसिड के साथ नमूना- एक परखनली में 4-5 मिली मूत्र डाला जाता है और अभिकर्मक की 8-10 बूंदें डाली जाती हैं। मूत्र में प्रोटीन की उपस्थिति में, इसकी मात्रा के आधार पर, मैलापन या फ्लोक्यूलेशन हो सकता है।

3. एक्सप्रेस टेस्ट (ड्राई डायग्नोस्टिक टेस्ट)- एल्बुफन इंडिकेटर पेपर की एक पट्टी को परीक्षण मूत्र में डुबोया जाता है ताकि दोनों संकेतक क्षेत्र एक साथ सिक्त हो जाएं (ऊपरी क्षेत्र पीएच निर्धारण के लिए है, निचला क्षेत्र प्रोटीन निर्धारण के लिए है)। 2-3 सेकंड के बाद, पट्टी को एक सफेद कांच की प्लेट पर रख दिया जाता है। संकेतक स्ट्रिप्स के साथ मामले पर मुद्रित रंग पैमाने का उपयोग करके मूत्र के साथ पट्टी को गीला करने के 60 सेकंड बाद मूल्यांकन किया जाता है।

बी) मात्रात्मक नमूने- मूत्र के उन हिस्सों में किया जाता है जहां प्रोटीन अपने गुणात्मक निर्धारण के दौरान पाया गया था; निर्धारण सतह पर तैरनेवाला में centrifugation के बाद किया जाता है

ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि- 50% नाइट्रिक एसिड घोल का 1-3 मिली एक परखनली में डाला जाता है और उतनी ही मात्रा में मूत्र को दीवार के साथ सावधानी से बिछाया जाता है। स्टॉपवॉच पर समय रिकॉर्ड किया जाता है। यदि तरल पदार्थ के इंटरफेस पर रिंग लेयरिंग के तुरंत बाद या 2 मिनट से पहले बनती है, तो मूत्र को पानी से पतला होना चाहिए। उसके बाद, पतला मूत्र में प्रोटीन का बार-बार निर्धारण किया जाता है। जब तक पतला मूत्र नाइट्रिक एसिड में जोड़ा जाता है, तब तक दूसरे और तीसरे मिनट के बीच एक सफेद अंगूठी दिखाई देने तक पतलापन किया जाता है। प्रोटीन की मात्रा कमजोर पड़ने की डिग्री से 0.033 पीपीएम को गुणा करके निर्धारित की जाती है।

18. फ्लोरा, गोनोकोकी, ट्राइकोमोनास, साइटोलॉजिकल परीक्षा, केपीआई के लिए स्मीयर लेने की तकनीक।

फ्लोरा स्मीयर तकनीक: सामग्री को गर्भाशय ग्रीवा नहर से और मूत्रमार्ग से दृश्य नियंत्रण में एक विशेष ब्रश के साथ लिया जाता है। परिणामी नमूने को तुरंत कांच की स्लाइड पर रखा जाता है और ट्रिट्यूरेट किया जाता है।

ट्राइकोमोनास के लिए स्मीयर लेने की तकनीक: सबसे पहले, सामग्री को मूत्रमार्ग के श्लेष्म झिल्ली (जघन सिम्फिसिस पर 1 मिनट के लिए इसकी प्रारंभिक मालिश के बाद) और योनि के पीछे के फोर्निक्स से स्क्रैप करके लिया जाता है, फिर गर्भाशय ग्रीवा के योनि भाग को एक से मिटा दिया जाता है बाँझ झाड़ू खारा के साथ सिक्त, श्लेष्म प्लग को हटा दिया जाता है, गर्भाशय ग्रीवा नहर में ध्यान से 1.0-1.5 सेमी से अधिक की गहराई तक, एक जांच डाली जाती है और गर्भाशय ग्रीवा के श्लेष्म झिल्ली से एक स्क्रैपिंग ली जाती है।

गोनोकोकी के लिए स्मीयर तकनीक: सामग्री को खारा, योनि चिमटी या एक विशेष जांच के साथ सिक्त कपास झाड़ू से पोंछने के बाद मूत्रमार्ग, बार्थोलिन ग्रंथियों और पैरायूरेथ्रल मार्ग से लिया जाता है। मलाशय से, सामग्री को एक कुंद चम्मच से लिया जाता है। क्रोनिक और टॉरपीड गोनोरिया में, रोगज़नक़ की पहचान करने की संभावना को बढ़ाने के लिए अध्ययन से पहले एक उकसावे का प्रदर्शन किया जाता है।

आप सामग्री को एक कपास झाड़ू के साथ और मासिक धर्म के दौरान नहीं ले सकते।

साइटोलॉजिकल परीक्षा के लिए स्मीयर लेने की तकनीक: एक स्मीयर एक्सोकर्विक्स, योनि और योनी की सतह से एक स्पैटुला के साथ, एंडोकर्विक्स से - एक एंडो ब्रश के साथ लिया जाता है। सामग्री को विशेष रूप से उपचारित स्किम्ड ग्लास पर एक पतली परत में लगाया जाता है और कोशिकाओं को सूखने से बचाने के लिए एक विशेष यौगिक के साथ इलाज किया जाता है। पपनिकोलाउ विधि (तथाकथित पैप स्मीयर) और सूक्ष्मदर्शी के अनुसार तैयारियों को दाग दिया जाता है।

कैरियोपाइक्नोटिक इंडेक्स- वेसिकुलर (गैर-पाइकोनोटिक) नाभिक वाली कोशिकाओं के लिए पाइक्नोटिक नाभिक के साथ सतह कोशिकाओं का प्रतिशत। मासिक धर्म चक्र के कूपिक चरण की शुरुआत में सीपीआई 25-30% है, ओव्यूलेशन के समय तक 60-70%, ल्यूटियल चरण में यह घटकर 25% हो जाता है।

यह गुर्दे और मूत्र पथ के रोगों के सबसे महत्वपूर्ण और निरंतर लक्षणों में से एक है। मूत्र में प्रोटीन की मात्रा का निर्धारण मूत्र के अध्ययन का एक अनिवार्य और महत्वपूर्ण तत्व है। प्रोटीनमेह का पता लगाना और मात्रा का ठहराव न केवल कई प्राथमिक और माध्यमिक गुर्दे की बीमारियों के निदान में महत्वपूर्ण है, बल्कि गतिकी में प्रोटीनमेह की गंभीरता में परिवर्तन का आकलन रोग प्रक्रिया के पाठ्यक्रम और उपचार की प्रभावशीलता के बारे में जानकारी देता है। मूत्र में प्रोटीन का पता लगाना, यहां तक ​​​​कि थोड़ी मात्रा में भी, संभावित गुर्दे या मूत्र पथ की बीमारी के लिए सतर्क होना चाहिए और पुन: विश्लेषण की आवश्यकता है। विशेष रूप से नोट मूत्र के अध्ययन की मूर्खता है और, विशेष रूप से, इसके संग्रह के सभी नियमों का पालन किए बिना मूत्र प्रोटीन का निर्धारण।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के सभी तरीकों में विभाजित किया जा सकता है:

• गुणवत्ता,
• अर्ध-मात्रात्मक,
• मात्रात्मक।

गुणात्मक तरीके

हर चीज़ मूत्र में प्रोटीन के लिए गुणात्मक परीक्षणविभिन्न भौतिक और रासायनिक कारकों के प्रभाव में प्रोटीन को विकृत करने की क्षमता के आधार पर। परीक्षण मूत्र के नमूने में प्रोटीन की उपस्थिति में, या तो मैलापन या flocculation प्रकट होता है।

जमावट प्रतिक्रिया के आधार पर मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए शर्तें:

1. मूत्र अम्लीय होना चाहिए। क्षारीय मूत्र को एसिटिक एसिड (5 - 10%) की कुछ (2 - 3) बूंदों के साथ अम्लीकृत किया जाता है।
2. पेशाब साफ होना चाहिए। एक पेपर फिल्टर के माध्यम से मैलापन हटा दिया जाता है। यदि धुंध बनी रहती है, तो तालक या जले हुए मैग्नेशिया (लगभग 1 चम्मच प्रति 100 मिलीलीटर मूत्र) मिलाएं, हिलाएं और छान लें।
3. एक गुणात्मक नमूना दो टेस्ट ट्यूबों में किया जाना चाहिए, उनमें से एक नियंत्रण एक है।
4. मैलापन की तलाश संचरित प्रकाश में एक काली पृष्ठभूमि पर होनी चाहिए।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए गुणात्मक विधियों में शामिल हैं:

• उबलते परीक्षण, और अन्य।

कई अध्ययनों से पता चला है कि मूत्र में प्रोटीन के गुणात्मक निर्धारण के लिए बड़ी संख्या में ज्ञात विधियों में से कोई भी विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान नहीं करता है। इसके बावजूद, रूस में अधिकांश डीएलटी में, इन विधियों का व्यापक रूप से स्क्रीनिंग के रूप में उपयोग किया जाता है - मूत्र में सकारात्मक गुणात्मक प्रतिक्रिया के साथ, प्रोटीन का आगे मात्रात्मक निर्धारण किया जाता है। गुणात्मक प्रतिक्रियाओं में से, गेलर परीक्षण और सल्फ़ोसैलिसिलिक एसिड परीक्षण का अधिक सामान्यतः उपयोग किया जाता है, लेकिन सल्फ़ोसैलिसिलिक एसिड परीक्षण को आमतौर पर रोग संबंधी प्रोटीनमेह का पता लगाने के लिए सबसे उपयुक्त माना जाता है। क्वथनांक परीक्षण वर्तमान में इसकी जटिलता और अवधि के कारण व्यावहारिक रूप से उपयोग नहीं किया जाता है।

अर्ध-मात्रात्मक तरीके

प्रति अर्ध-मात्रात्मक तरीकेसंबंधित:

• डायग्नोस्टिक टेस्ट स्ट्रिप्स का उपयोग करके मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण।

ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि गेलर रिंग परीक्षण पर आधारित है, इसलिए, इस पद्धति के साथ, गेलर परीक्षण के समान ही त्रुटियां देखी जाती हैं।

वर्तमान में, मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए डायग्नोस्टिक स्ट्रिप्स का तेजी से उपयोग किया जाता है। साइट्रेट बफर में ब्रोमोफेनॉल ब्लू डाई का उपयोग अक्सर एक पट्टी पर मूत्र में प्रोटीन के अर्ध-मात्रात्मक निर्धारण के लिए एक संकेतक के रूप में किया जाता है। मूत्र में प्रोटीन की मात्रा नीले-हरे रंग की तीव्रता से आंकी जाती है जो मूत्र के साथ प्रतिक्रिया क्षेत्र के संपर्क के बाद विकसित होती है। परिणाम का मूल्यांकन नेत्रहीन या मूत्र विश्लेषक का उपयोग करके किया जाता है। शुष्क रसायन विज्ञान विधियों (सादगी, विश्लेषण की गति) की महान लोकप्रियता और स्पष्ट लाभों के बावजूद, सामान्य रूप से यूरिनलिसिस के ये तरीके और विशेष रूप से प्रोटीन निर्धारण गंभीर कमियों के बिना नहीं हैं। उनमें से एक, नैदानिक ​​जानकारी के विरूपण के लिए अग्रणी, अन्य प्रोटीन की तुलना में ब्रोमोफेनॉल ब्लू के एल्ब्यूमिन के संकेतक की अधिक संवेदनशीलता है। इस संबंध में, परीक्षण स्ट्रिप्स मुख्य रूप से चयनात्मक ग्लोमेरुलर प्रोटीनुरिया का पता लगाने के लिए अनुकूलित होते हैं, जब लगभग सभी मूत्र प्रोटीन एल्ब्यूमिन द्वारा दर्शाए जाते हैं। परिवर्तनों की प्रगति और चयनात्मक ग्लोमेरुलर प्रोटीनुरिया के गैर-चयनात्मक (मूत्र में ग्लोब्युलिन की उपस्थिति) के संक्रमण के साथ, प्रोटीन निर्धारण के परिणामों को वास्तविक मूल्यों की तुलना में कम करके आंका जाता है। यह तथ्य गतिशीलता में गुर्दे (ग्लोमेरुलर फिल्टर) की स्थिति का आकलन करने के लिए मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए इस पद्धति का उपयोग करना असंभव बनाता है। ट्यूबलर प्रोटीनुरिया के साथ, प्रोटीन निर्धारण के परिणामों को भी कम करके आंका जाता है। डिपस्टिक के साथ प्रोटीन परीक्षण प्रोटीनूरिया के निम्न स्तर का एक विश्वसनीय संकेतक नहीं है (वर्तमान में उपलब्ध अधिकांश डिपस्टिक्स मूत्र में 0.15 ग्राम/ली से कम सांद्रता में प्रोटीन का पता लगाने में सक्षम नहीं हैं)। स्ट्रिप्स पर प्रोटीन निर्धारण के नकारात्मक परिणाम मूत्र में ग्लोब्युलिन, हीमोग्लोबिन, यूरोमुकोइड, बेंस-जोन्स प्रोटीन और अन्य पैराप्रोटीन की उपस्थिति को बाहर नहीं करते हैं।

ग्लाइकोप्रोटीन की एक उच्च सामग्री के साथ बलगम के गुच्छे (उदाहरण के लिए, मूत्र पथ में भड़काऊ प्रक्रियाओं में, पायरिया, बैक्टीरियूरिया) पट्टी के संकेतक क्षेत्र पर बस सकते हैं और झूठे सकारात्मक परिणाम दे सकते हैं। झूठे सकारात्मक परिणाम भी उच्च यूरिया सांद्रता से जुड़े हो सकते हैं। खराब रोशनी और खराब रंग धारणा के कारण गलत परिणाम हो सकते हैं।

इस संबंध में, डायग्नोस्टिक स्ट्रिप्स का उपयोग स्क्रीनिंग प्रक्रियाओं तक सीमित होना चाहिए, और उनकी मदद से प्राप्त परिणामों को केवल सांकेतिक माना जाना चाहिए।

मात्रात्मक विधियां

सही मूत्र में प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारणकुछ मामलों में यह एक मुश्किल काम साबित होता है। इसके समाधान की कठिनाइयाँ निम्नलिखित कारकों द्वारा निर्धारित की जाती हैं:

• एक स्वस्थ व्यक्ति के मूत्र में कम प्रोटीन सामग्री, अक्सर सबसे ज्ञात तरीकों की संवेदनशीलता की दहलीज पर;
• कई यौगिकों के मूत्र में उपस्थिति जो रासायनिक प्रतिक्रियाओं के दौरान हस्तक्षेप कर सकती है;
• विभिन्न रोगों में मूत्र प्रोटीन की सामग्री और संरचना में महत्वपूर्ण उतार-चढ़ाव, जिससे पर्याप्त अंशांकन सामग्री चुनना मुश्किल हो जाता है।

नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं में, मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए तथाकथित "नियमित" विधियों का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है, लेकिन वे हमेशा संतोषजनक परिणाम प्रदान नहीं करते हैं।

प्रयोगशाला में काम कर रहे एक विश्लेषक के दृष्टिकोण से, मूत्र में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए डिज़ाइन की गई एक विधि को निम्नलिखित आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए:

• रासायनिक प्रतिक्रिया के दौरान गठित कॉम्प्लेक्स के अवशोषण और नमूने में प्रोटीन सामग्री के बीच एक व्यापक संबंध है, जो अनुसंधान के लिए नमूना तैयार करते समय अतिरिक्त संचालन से बचने की अनुमति देगा;
• सरल होना चाहिए, कलाकार की उच्च योग्यता की आवश्यकता नहीं है, कम संख्या में संचालन के साथ किया जाना चाहिए;
• परीक्षण सामग्री के छोटे संस्करणों का उपयोग करते समय उच्च संवेदनशीलता, विश्लेषणात्मक विश्वसनीयता है;
• विभिन्न कारकों (नमूने की संरचना में उतार-चढ़ाव, दवाओं की उपस्थिति, आदि) के लिए प्रतिरोधी होना;
• एक स्वीकार्य लागत है;
• स्वतःविश्लेषकों के लिए आसानी से अनुकूलनीय हो;
• निर्धारण का परिणाम अध्ययन के तहत मूत्र के नमूने की प्रोटीन संरचना पर निर्भर नहीं होना चाहिए।

मूत्र में प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए वर्तमान में ज्ञात विधियों में से कोई भी पूरी तरह से "स्वर्ण मानक" होने का दावा नहीं कर सकता है।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए मात्रात्मक तरीकों को टर्बिडीमेट्रिक और वर्णमिति में विभाजित किया जा सकता है।

टर्बिडिमेट्रिक तरीके

टर्बिडिमेट्रिक विधियों में शामिल हैं:

• सल्फोसैलिसिलिक एसिड (एसएसके) के साथ प्रोटीन का निर्धारण,
• ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड (TCA) के साथ प्रोटीन का निर्धारण,
• बेंजेथोनियम क्लोराइड के साथ प्रोटीन का निर्धारण।

टर्बिडिमेट्रिक विधियां अवक्षेपण एजेंटों के प्रभाव में निलंबित कणों के निलंबन के गठन के कारण मूत्र प्रोटीन की घुलनशीलता में कमी पर आधारित हैं। परीक्षण नमूने में प्रोटीन सामग्री को या तो प्रकाश के प्रकीर्णन की तीव्रता से, प्रकाश-प्रकीर्णन कणों की संख्या (विश्लेषण की नेफेलोमेट्रिक विधि) द्वारा निर्धारित किया जाता है, या परिणामी निलंबन (विश्लेषण की टर्बिडिमेट्रिक विधि) द्वारा प्रकाश प्रवाह के कमजोर होने से आंका जाता है। )

मूत्र में प्रोटीन का पता लगाने के लिए वर्षा के तरीकों में प्रकाश के बिखरने की मात्रा कई कारकों पर निर्भर करती है: अभिकर्मकों की मिश्रण दर, प्रतिक्रिया मिश्रण का तापमान, माध्यम का पीएच मान, विदेशी यौगिकों की उपस्थिति, फोटोमेट्रिक विधियाँ। प्रतिक्रिया की स्थिति का सावधानीपूर्वक अवलोकन एक स्थिर कण आकार के साथ एक स्थिर निलंबन के गठन और अपेक्षाकृत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने में योगदान देता है।

कुछ दवाएं मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए टर्बिडीमेट्रिक विधियों के परिणामों में हस्तक्षेप करती हैं, जिससे तथाकथित "झूठे सकारात्मक" या "झूठे नकारात्मक" परिणाम सामने आते हैं। इनमें कुछ एंटीबायोटिक्स (बेंज़िलपेनिसिलिन, क्लोक्सासिलिन, आदि), रेडियोपैक आयोडीन युक्त पदार्थ, सल्फ़ानिलमाइड तैयारी शामिल हैं।

टर्बिडिमेट्रिक विधियों को मानकीकृत करना मुश्किल है और अक्सर गलत परिणाम देते हैं, लेकिन इसके बावजूद, वर्तमान में कम लागत और अभिकर्मकों की उपलब्धता के कारण प्रयोगशालाओं में उनका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। रूस में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली विधि सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ प्रोटीन का निर्धारण है।

वर्णमिति तरीके

प्रोटीन की विशिष्ट रंग प्रतिक्रियाओं के आधार पर, कुल मूत्र प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए सबसे संवेदनशील और सटीक वर्णमिति विधियां हैं।

इसमें शामिल है:

1. बाय्यूरेट प्रतिक्रिया,
2. लोरी विधि,
3. प्रोटीन के साथ कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए विभिन्न रंगों की क्षमता पर आधारित तरीके:
   • पोंसेउ एस (पोंसेउ एस),
   • Coomassie Brilliant Blue (Coomassie Brilliant Blue)
   • पायरोगैलोल लाल (पाइरोगॉल लाल)।

कलाकार के दृष्टिकोण से, अनुसंधान के एक बड़े प्रवाह के साथ प्रयोगशाला के दैनिक कार्य में, बड़ी संख्या में संचालन के कारण बायोरेट विधि असुविधाजनक है। इसी समय, विधि को उच्च विश्लेषणात्मक विश्वसनीयता की विशेषता है, सांद्रता की एक विस्तृत श्रृंखला में प्रोटीन के निर्धारण और तुलनीय संवेदनशीलता के साथ एल्ब्यूमिन, ग्लोब्युलिन और पैराप्रोटीन का पता लगाने की अनुमति देता है, जिसके परिणामस्वरूप बायोरेट विधि को एक के रूप में माना जाता है। मूत्र में प्रोटीन का पता लगाने के लिए अन्य विश्लेषणात्मक तरीकों की तुलना के लिए संदर्भ और सिफारिश की जाती है। मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए बायोरेट विधि अधिमानतः नेफ्रोलॉजिकल विभागों की सेवा करने वाली प्रयोगशालाओं में की जाती है और उन मामलों में उपयोग की जाती है जहां अन्य तरीकों का उपयोग करके निर्धारण के परिणाम संदिग्ध होते हैं, साथ ही नेफ्रोलॉजिकल रोगियों में दैनिक प्रोटीन हानि की मात्रा निर्धारित करने के लिए भी उपयोग किया जाता है।

लोरी विधि, जिसमें बायोरेट विधि की तुलना में अधिक संवेदनशीलता होती है, प्रोटीन अणु में अमीनो एसिड टाइरोसिन और ट्रिप्टोफैन के लिए बायोरेट प्रतिक्रिया और फोलिन प्रतिक्रिया को जोड़ती है। इसकी उच्च संवेदनशीलता के बावजूद, यह विधि हमेशा मूत्र में प्रोटीन सामग्री के निर्धारण में विश्वसनीय परिणाम प्रदान नहीं करती है। इसका कारण मूत्र के गैर-प्रोटीन घटकों (अक्सर अमीनो एसिड, यूरिक एसिड, कार्बोहाइड्रेट) के साथ फोलिन के अभिकर्मक की गैर-विशिष्ट बातचीत है। डायलिसिस या प्रोटीन वर्षा द्वारा इन और अन्य मूत्र घटकों को अलग करने से मूत्र में प्रोटीन के मात्रात्मक निर्धारण के लिए इस पद्धति का सफलतापूर्वक उपयोग किया जा सकता है। कुछ दवाएं - सैलिसिलेट्स, क्लोरप्रोमाज़िन, टेट्रासाइक्लिन इस पद्धति को प्रभावित कर सकती हैं और अध्ययन के परिणामों को विकृत कर सकती हैं।

पर्याप्त संवेदनशीलता, अच्छी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता, और डाई बाइंडिंग द्वारा प्रोटीन निर्धारण में आसानी इन विधियों को आशाजनक बनाती है, लेकिन अभिकर्मकों की उच्च लागत प्रयोगशालाओं में उनके व्यापक उपयोग में बाधा डालती है। वर्तमान में, रूस में पायरोगैलोल लाल के साथ विधि अधिक व्यापक होती जा रही है।

प्रोटीनमेह के स्तर की जांच करते समय, यह ध्यान में रखना चाहिए कि प्रोटीनमेह का निर्धारण करने के विभिन्न तरीकों में कई मूत्र प्रोटीनों के लिए अलग संवेदनशीलता और विशिष्टता होती है।

प्रोटीनुरिया = 0.4799 बी + 0.5230 एल;
प्रोटीनुरिया = 1.5484 बी - 0.4825 एस;
प्रोटीनुरिया = 0.2167 एस + 0.7579 एल;
प्रोटीनुरिया = 1.0748 पी - 0.0986 बी;
प्रोटीनुरिया = 1.0104 पी - 0.0289 एस;
प्रोटीनुरिया = 0.8959 पी + 0.0845 एल;

कहाँ पे:
बी- Coomassie G-250 के साथ माप परिणाम;
ली- लोरी के अभिकर्मक के साथ माप का परिणाम;
पी- पाइरोगॉलोल मोलिब्डेट के साथ माप परिणाम;
एस- सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ माप का परिणाम।

दिन के अलग-अलग समय में प्रोटीनुरिया के स्तर में स्पष्ट उतार-चढ़ाव को ध्यान में रखते हुए, साथ ही मूत्र में प्रोटीन की एकाग्रता की मूत्र पर निर्भरता, मूत्र के अलग-अलग हिस्सों में इसकी अलग-अलग सामग्री, अब यह आकलन करने के लिए प्रथागत है। मूत्र में प्रोटीन के दैनिक नुकसान से गुर्दे की विकृति में प्रोटीनमेह की गंभीरता, अर्थात् तथाकथित दैनिक प्रोटीनमेह निर्धारित करने के लिए। इसे g/दिन में व्यक्त किया जाता है।

यदि दैनिक मूत्र एकत्र करना असंभव है, तो मूत्र के एक हिस्से में प्रोटीन और क्रिएटिनिन की एकाग्रता को निर्धारित करने की सिफारिश की जाती है। चूंकि दिन के दौरान क्रिएटिनिन रिलीज की दर काफी स्थिर होती है और पेशाब की दर में बदलाव पर निर्भर नहीं होती है, प्रोटीन एकाग्रता का क्रिएटिनिन एकाग्रता का अनुपात स्थिर होता है। यह अनुपात दैनिक प्रोटीन उत्सर्जन के साथ अच्छी तरह से संबंध रखता है और इसलिए, प्रोटीनूरिया की गंभीरता का आकलन करने के लिए इसका उपयोग किया जा सकता है। आम तौर पर, प्रोटीन/क्रिएटिनिन अनुपात 0.2 से कम होना चाहिए। प्रोटीन और क्रिएटिनिन को g/l में मापा जाता है। प्रोटीन-क्रिएटिनिन अनुपात द्वारा प्रोटीनमेह की गंभीरता का आकलन करने की विधि का एक महत्वपूर्ण लाभ दैनिक मूत्र की असंभवता या अपूर्ण संग्रह से जुड़ी त्रुटियों का पूर्ण उन्मूलन है।

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दैनिक मूत्र में थोड़ी मात्रा में प्रोटीन भी काफी स्वस्थ व्यक्तियों में पाया जाता है, हालांकि, वर्तमान में उपयोग की जाने वाली विधियों द्वारा एकल भागों में ऐसी छोटी सांद्रता का पता नहीं लगाया जाता है। लगभग 70% स्वस्थ मानव मूत्र प्रोटीन यूरोमुकोइड होते हैं, एक प्रोटीन जो गुर्दे के ऊतकों का एक उत्पाद है; इस प्रकार, स्वस्थ लोगों के मूत्र में ग्लोमेरुलर प्रोटीन का अनुपात नगण्य होता है और प्रोटीनुरिया सामान्य रूप से 50-150 मिलीग्राम / दिन होता है, जिसमें अधिकांश मूत्र प्रोटीन सीरम के समान होते हैं।

यह घटना के स्थान के आधार पर प्रोटीनूरिया के निम्नलिखित रूपों को अलग करने के लिए प्रथागत है: प्रीरेनल, ऊतक प्रोटीन टूटने में वृद्धि, हेमोलिसिस का उच्चारण; गुर्दे, गुर्दे की विकृति के कारण, जिसे ग्लोमेरुलर और ट्यूबलर में विभाजित किया जा सकता है; पोस्टरेनल, मूत्र पथ के विकृति से जुड़ा हुआ है और अक्सर सूजन के कारण होता है।

अस्तित्व की अवधि के आधार पर, स्थायी प्रोटीनुरिया अलग-थलग होता है, जो कई हफ्तों और वर्षों तक मौजूद रहता है, और क्षणिक, समय-समय पर प्रकट होता है, कभी-कभी गुर्दे की विकृति की अनुपस्थिति में भी, उदाहरण के लिए, बुखार और गंभीर नशा के साथ। प्रोटीनमेह की परिवर्तनशीलता के बीच अंतर करना उचित है: 1 ग्राम तक की दैनिक प्रोटीन हानि के साथ - मध्यम, 1 से 3 ग्राम तक - मध्यम और 3 ग्राम से अधिक - स्पष्ट।

मूत्र में अपेक्षाकृत बड़े आणविक भार वाले प्रोटीन का पता लगाना वृक्क फिल्टर की चयनात्मकता की अनुपस्थिति और इसके स्पष्ट नुकसान को इंगित करता है। इन मामलों में, कोई प्रोटीनमेह की कम चयनात्मकता की बात करता है। इसलिए, वर्तमान में, मूत्र के प्रोटीन अंशों की परिभाषा व्यापक हो गई है। स्टार्च और पॉलीएक्रिलामाइड जेल में वैद्युतकणसंचलन के सबसे सटीक तरीके।
इन विधियों द्वारा प्राप्त परिणामों के अनुसार, प्रोटीनमेह की चयनात्मकता का न्याय करना संभव है।

मूत्र में प्रोटीन का निर्धारण करने के लिए अधिकांश गुणात्मक और मात्रात्मक तरीके मूत्र की मात्रा में या मीडिया (मूत्र और एसिड) के इंटरफेस पर इसके जमाव पर आधारित होते हैं; यदि जमावट की तीव्रता को मापने का कोई तरीका है, तो नमूना मात्रात्मक हो जाता है।

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ मानकीकृत परीक्षण:

आवश्यक अभिकर्मक:

सल्फोसैलिसिलिक एसिड का 20% घोल।

अनुसंधान प्रगति:

फ़िल्टर किए गए मूत्र के 3 मिलीलीटर को 2 ट्यूबों में डाला जाता है। परखनली में अभिकर्मक की 6-8 बूंदें डालें। एक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर, नियंत्रण ट्यूब की प्रयोगात्मक एक के साथ तुलना करें। टेस्ट ट्यूब में मैलापन प्रोटीन की उपस्थिति को इंगित करता है, नमूना सकारात्मक माना जाता है।

यदि मूत्र की प्रतिक्रिया क्षारीय है, तो अध्ययन से पहले इसे एसिटिक एसिड के 10% घोल की 2-3 बूंदों के साथ अम्लीकृत किया जाता है।

यूनिफाइड ब्रैंडबर्ग-रॉबर्ट्स-स्टोलनिकोव विधि:

विधि हेलर रिंग टेस्ट पर आधारित है, जिसमें यह तथ्य शामिल है कि नाइट्रिक एसिड और मूत्र की सीमा पर, प्रोटीन की उपस्थिति में, इसका जमावट होता है और एक सफेद अंगूठी दिखाई देती है।

आवश्यक अभिकर्मक:

नाइट्रिक एसिड (सापेक्ष घनत्व 1.2) या लारियोनोवा के अभिकर्मक का 30% समाधान।
लारियोनोवा के अभिकर्मक की तैयारी: 20-30 ग्राम सोडियम क्लोराइड को 100 मिलीलीटर आसुत जल में गर्म करके ठंडा किया जाता है, फ़िल्टर किया जाता है। छानना के 99 मिलीलीटर में 1 मिलीलीटर केंद्रित नाइट्रिक एसिड मिलाया जाता है।

अनुसंधान प्रगति:

1-2 मिली नाइट्रिक एसिड (या लारियोनोवा के अभिकर्मक) को परखनली में डाला जाता है और उतनी ही मात्रा में फ़िल्टर किए गए मूत्र को परखनली की दीवार के साथ सावधानी से स्तरित किया जाता है। 2 और 3 मिनट के बीच दो तरल पदार्थों के बीच इंटरफेस में एक पतली सफेद अंगूठी की उपस्थिति लगभग 0.033 ग्राम/ली की एकाग्रता पर प्रोटीन की उपस्थिति को इंगित करती है। यदि परत लगाने के 2 मिनट से पहले अंगूठी दिखाई देती है, तो मूत्र को पानी से पतला किया जाना चाहिए और पहले से ही पतला मूत्र की बार-बार परत की जानी चाहिए। रिंग के प्रकार के आधार पर मूत्र के कमजोर पड़ने की डिग्री का चयन किया जाता है, अर्थात। इसकी चौड़ाई, कॉम्पैक्टनेस और उपस्थिति का समय। 2 मिनट से पहले दिखाई देने वाली एक फ़िलीफ़ॉर्म रिंग के साथ, मूत्र को 2 बार पतला किया जाता है, एक चौड़े के साथ - 4 बार, एक कॉम्पैक्ट के साथ - 8 बार, आदि। फिर प्रोटीन सांद्रता की गणना 0.033 को कमजोर पड़ने की डिग्री से गुणा करके की जाती है और ग्राम प्रति 1 लीटर (जी / एल) में व्यक्त की जाती है।

कभी-कभी बड़ी मात्रा में यूरेट की उपस्थिति में एक सफेद वलय प्राप्त होता है। प्रोटीन रिंग के विपरीत, यूरेट रिंग दो तरल पदार्थों के बीच की सीमा से थोड़ा ऊपर दिखाई देती है और कोमल हीटिंग के साथ घुल जाती है।

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के अतिरिक्त द्वारा गठित मैलापन द्वारा मूत्र में प्रोटीन का मात्रात्मक निर्धारण:

विधि सिद्धांत:

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ प्रोटीन जमावट के दौरान मैलापन की तीव्रता इसकी एकाग्रता के समानुपाती होती है।

आवश्यक अभिकर्मक:

1. सल्फोसैलिसिलिक एसिड का 3% घोल।

2. 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल।

3. एल्ब्यूमिन मानक घोल - 1% घोल (1 मिली घोल जिसमें 10 मिलीग्राम एल्ब्यूमिन होता है): 1 ग्राम लियोफिलाइज्ड एल्ब्यूमिन (मानव या गोजातीय सीरम से) 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल की एक छोटी मात्रा में एक फ्लास्क में घोल दिया जाता है। 100 मिली, और फिर उसी घोल से निशान तक पतला करें। 5% सोडियम एजाइड घोल (NaN3) का 1 मिली मिला कर अभिकर्मक को स्थिर किया जाता है। जब रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है, तो अभिकर्मक 2 महीने के लिए अच्छा होता है।

विशेष उपकरण - फोटोइलेक्ट्रिक वर्णमापी।

अनुसंधान प्रगति:

फ़िल्टर किए गए मूत्र के 1.25 मिलीलीटर को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है, मिश्रित सल्फोसैलिसिलिक एसिड के 3% समाधान के साथ 5 मिलीलीटर तक। 5 मिनट के बाद, इसे 5 मिमी की ऑप्टिकल पथ लंबाई के साथ क्युवेट में नियंत्रण के विरुद्ध 590-650 एनएम (नारंगी या लाल बत्ती फिल्टर) के तरंग दैर्ध्य पर एक फोटोइलेक्ट्रोक्लोरिमीटर पर मापा जाता है। टेस्ट ट्यूब एक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है, जिसमें 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान 1.25 मिलीलीटर फ़िल्टर्ड मूत्र में 5 मिलीलीटर में जोड़ा गया था। गणना अंशांकन ग्राफ के अनुसार की जाती है, जिसके निर्माण के लिए मानक समाधान से dilutions तैयार किए जाते हैं, जैसा कि तालिका में दर्शाया गया है।

प्राप्त प्रत्येक घोल से, 1.25 मिलीलीटर लिया जाता है और प्रयोगात्मक नमूने के रूप में माना जाता है।

अंशांकन ग्राफ के निर्माण में सीधी रेखा निर्भरता को 1 g/l तक बनाए रखा जाता है। उच्च सांद्रता पर, नमूना पतला होना चाहिए और गणना में कमजोर पड़ने को ध्यान में रखा जाना चाहिए।

मूत्र में कार्बनिक आयोडीन युक्त विपरीत एजेंटों की उपस्थिति में गलत-सकारात्मक परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं। इसलिए, आयोडीन की तैयारी करने वाले व्यक्तियों में परीक्षण का उपयोग नहीं किया जा सकता है; एक गलत-सकारात्मक परिणाम सल्फा दवाओं के उपयोग, पेनिसिलिन की बड़ी खुराक और यूरिक एसिड की उच्च सांद्रता के कारण भी हो सकता है।

ब्यूरेट विधि:

विधि सिद्धांत:

क्षारीय में तांबे के लवण के साथ प्रोटीन के पेप्टाइड बंधन एक बैंगनी परिसर बनाते हैं। प्रोटीन ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड के साथ पहले से अवक्षेपित होते हैं।

आवश्यक अभिकर्मक:

1. 10% ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड घोल।
2. 20% तांबे का घोल (CuSO4∙5H2O)।
3. 3% NaOH समाधान।

अनुसंधान प्रगति:

दैनिक मात्रा से लिए गए मूत्र के 5 मिलीलीटर में, 3 मिलीलीटर ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड समाधान, अपकेंद्रित्र को तलछट की निरंतर मात्रा में जोड़ें। सतह पर तैरनेवाला एक पिपेट के साथ चूसा जाता है, फिर अवक्षेप को NaOH समाधान के 5 मिलीलीटर में भंग कर दिया जाता है। समाधान में 0.25 मिलीलीटर CuSO4 मिलाया जाता है, मिश्रण को हिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला क्युवेट में 540 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर आसुत जल के खिलाफ 10 मिमी की ऑप्टिकल पथ लंबाई के साथ फोटोमीटर किया जाता है। प्रोटीन सांद्रता की गणना अंशांकन वक्र के अनुसार की जाती है, जिसके निर्माण में प्रोटीन सांद्रता (g/l) को कोर्डिनेट अक्ष पर प्लॉट किया जाता है, और विलुप्त होने वाली इकाइयों में ऑप्टिकल घनत्व को एब्सिस्सा अक्ष पर प्लॉट किया जाता है। प्राप्त एकाग्रता के अनुसार, मूत्र में प्रोटीन की दैनिक हानि की गणना की जाती है।

इंडिकेटर पेपर (स्ट्रिप्स) का उपयोग करना:

संकेतक पेपर (स्ट्रिप्स) का उपयोग करके प्रोटीन का पता लगाया जा सकता है, जो अल्बुफन, एम्स (इंग्लैंड), एल्बस्टिक्स, बोहरिंगर (जर्मनी), कॉम्बर्टेस्ट, आदि द्वारा निर्मित होते हैं।

सिद्धांत कुछ एसिड-बेस संकेतकों की तथाकथित प्रोटीन त्रुटि की घटना पर आधारित है। कागज का संकेतक भाग टेट्राब्रोमोफेनॉल ब्लू और साइट्रेट बफर के साथ लगाया जाता है। जब कागज गीला होता है, तो बफर घुल जाता है और संकेतक प्रतिक्रिया के लिए उपयुक्त पीएच प्रदान करता है।

3.0-3.5 पर, प्रोटीन के अमीनो समूह संकेतक के साथ प्रतिक्रिया करते हैं और इसके प्रारंभिक पीले रंग को हरे-नीले रंग में बदलते हैं, जिसके बाद, रंग पैमाने की तुलना में, अध्ययन के तहत मूत्र में प्रोटीन एकाग्रता का मोटे तौर पर अनुमान लगाया जा सकता है। परीक्षण स्ट्रिप्स के सही संचालन के लिए मुख्य शर्त प्रतिक्रिया को आगे बढ़ने के लिए 3.0-3.5 की सीमा में पीएच प्रदान करना है।

यदि कागज निर्देशों में निर्दिष्ट जोखिम से अधिक समय तक परीक्षण मूत्र के संपर्क में है, तो साइट्रेट बफर इसमें घुल जाता है, और फिर संकेतक मूत्र के वास्तविक पीएच पर प्रतिक्रिया करता है, अर्थात। झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया देता है। इस तथ्य के कारण कि बफर की क्षमता सीमित है, भले ही दिशानिर्देशों का पालन किया जाता है, बहुत क्षारीय मूत्र (पीएच> 6.5) के नमूनों में और बहुत अम्लीय मूत्र (पीएच) के नमूनों में गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त होते हैं।
अलग-अलग प्रोटीन की संरचना में प्रतिक्रियाशील अमीनो समूहों की संख्या भिन्न होती है, इसलिए, एल्ब्यूमिन समान मात्रा में -ग्लोबुलिन (बेंस-जोन्स प्रोटीन, पैराप्रोटीन) की तुलना में 2 गुना अधिक तीव्रता से प्रतिक्रिया करते हैं, और ग्लाइकोप्रोटीन की तुलना में बहुत अधिक तीव्रता से प्रतिक्रिया करते हैं। हालांकि, ग्लाइकोप्रोटीन की एक उच्च सामग्री (मूत्र पथ की सूजन के साथ) के साथ बड़ी मात्रा में बलगम के साथ, संकेतक पट्टी पर जमा बलगम के गुच्छे झूठे सकारात्मक परिणाम दे सकते हैं।

संकेतक पेपर के अलग-अलग उत्पादन बैचों के साथ-साथ एक ही कंपनी द्वारा उत्पादित अलग-अलग प्रकार के पेपर की संवेदनशीलता भिन्न हो सकती है, इसलिए, इस विधि द्वारा प्रोटीन की मात्रा का सावधानी से इलाज किया जाना चाहिए। इंडिकेटर पेपर का उपयोग करके मूत्र में प्रोटीन की दैनिक हानि का निर्धारण संभव नहीं है। इस प्रकार, संकेतक कागज रासायनिक नमूनों से नीच है, मुख्य रूप से सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ एक नमूना, हालांकि यह नमूनों की एक श्रृंखला का जल्दी से अध्ययन करना संभव बनाता है।

मूत्र में बेंस-जोन्स प्रोटीन का पता लगाना:

मल्टीपल मायलोमा, वाल्डेनस्ट्रॉम के मैक्रोग्लोबुलिनमिया के साथ मूत्र में बेंस-जोन्स प्रोटीन उत्सर्जित किया जा सकता है।

अध्ययन केवल सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ सकारात्मक परीक्षण के साथ आयोजित करने की सलाह दी जाती है। बेंस-जोन्स प्रोटीन का पता लगाने के लिए संकेतक पेपर अनुपयुक्त है।

सिद्धांत:

थर्मोप्रेजर्वेशन रिएक्शन के आधार पर। 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर बेंस-जोन्स प्रोटीन के विघटन या बाद में ठंडा होने पर पुन: वर्षा का मूल्यांकन करने वाले तरीके अविश्वसनीय हैं, क्योंकि सभी बेंस-जोन्स प्रोटीन निकायों में उपयुक्त गुण नहीं होते हैं। इस पैराप्रोटीन का सबसे विश्वसनीय पता 40-60 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर वर्षा द्वारा होता है, लेकिन इन परिस्थितियों में भी, बहुत अम्लीय (पीएच 6.5) मूत्र में, मूत्र के कम सापेक्ष घनत्व पर और कम पर वर्षा नहीं हो सकती है। बेंस-जोन्स प्रोटीन की सांद्रता।

आवश्यक अभिकर्मक:

2 एम एसीटेट बफर पीएच 4.9।

अनुसंधान प्रगति:

4 मिलीलीटर की मात्रा में फ़िल्टर किए गए मूत्र को 1 मिलीलीटर बफर के साथ मिलाया जाता है और 15 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पानी के स्नान में गरम किया जाता है। बेन्स-जोन्स प्रोटीन की उपस्थिति में, 2 मिनट के भीतर एक स्पष्ट अवक्षेप दिखाई देता है; यदि बेन्स-जोन्स प्रोटीन की सांद्रता 3 g / l से कम है, तो नमूना नकारात्मक हो सकता है। व्यवहार में, यह अत्यंत दुर्लभ है, क्योंकि अधिकांश भाग के लिए मूत्र में बेन्स-जोन्स प्रोटीन की एकाग्रता महत्वपूर्ण है।

पूर्ण निश्चितता के साथ, इम्यूनोग्लोबुलिन की भारी और हल्की श्रृंखलाओं के खिलाफ विशिष्ट सीरा का उपयोग करके इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेटिक अध्ययन द्वारा बेंस-जोन्स प्रोटीन का पता लगाया जा सकता है।

एल्बमोसिस (प्रोटिओसिस) की परिभाषा:

एल्बुमोज प्रोटीन टूटने वाले उत्पाद हैं, जिसका सिद्धांत इस तथ्य पर आधारित है कि उबालने पर वे मुड़ते नहीं हैं, लेकिन एक सकारात्मक बायोरेट प्रतिक्रिया देते हैं और अम्लीय वातावरण में कुछ लवण, विशेष रूप से अमोनियम सल्फेट और जिंक एसीटेट द्वारा नमकीन होते हैं।

सामान्य मूत्र में एल्ब्यूमिन नहीं होता है। वीर्य द्रव के मिश्रण के मामले में सामान्य मूत्र में निशान हो सकते हैं। पैथोलॉजी में, ज्वर की स्थिति, रक्त और प्लाज्मा आधान, एक्सयूडेट्स और ट्रांसयूडेट्स के पुनर्जीवन और ट्यूमर के क्षय के दौरान मूत्र में एल्बमोस हो सकते हैं।

आवश्यक अभिकर्मक:

1. संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल।
2. सांद्रित सोडियम हाइड्रॉक्साइड विलयन।
3. कॉपर सल्फेट का कमजोर घोल (लगभग रंगहीन)।

अनुसंधान प्रगति:

सोडियम क्लोराइड का संतृप्त घोल (मात्रा का 1/3) एसिटिक एसिड के साथ अम्लीकृत मूत्र में मिलाया जाता है, उबाला जाता है और गर्म तरल को फ़िल्टर किया जाता है। एल्ब्यूज निस्यंद में चले जाते हैं, जिसमें उनकी उपस्थिति बाय्यूरेट प्रतिक्रिया से निर्धारित होती है। छानने में 1/2 मात्रा में सांद्र सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल और कॉपर सल्फेट के कमजोर घोल की कुछ बूंदें मिलाएं। एक सकारात्मक परीक्षण का परिणाम लाल-बैंगनी रंग में होता है।

सल्फोसैलिसिलिक एसिड के साथ सकारात्मक परीक्षण के साथ, मूत्र गर्म होता है। यदि मैलापन गायब हो जाता है और ठंडा होने पर फिर से प्रकट होता है, तो इसका मतलब है कि मूत्र में एल्ब्यूज या बेंस-जोन्स प्रोटीन बॉडी है।