بروتينية (بيلة بروتينية) - ظهور البروتين في البول بتركيزات تجعل من الممكن التعرف عليه بالطرق النوعية.

يميز

• بروتينية كلوية و
• بيلة بروتينية خارج الكلية (ما بعد الكلية)

بيلة بروتينية كلوية

تحدث البيلة البروتينية الكلوية بسبب تلف المرشح الكبيبي أو خلل في ظهارة الأنابيب الملتفة.

يميز بين البيلة البروتينية الانتقائية وغير الانتقائيةاعتمادًا على نسبة بعض البلازما والبروتينات البولية ووزنها الجزيئي وشحنتها.

بيلة بروتينية انتقائية

تحدث البيلة البروتينية الانتقائية بانتهاك ضئيل (غالبًا ما يكون عكسيًا) للمرشح الكبيبي ، والذي يمثله بروتينات منخفضة الوزن الجزيئي (الوزن الجزيئي لا يتجاوز 68000) - الألبومين ، السيرولوبلازمين ، الترانسفيرين.

بيلة بروتينية غير انتقائية

تعتبر البيلة البروتينية غير الانتقائية أكثر شيوعًا مع تلف المرشح الشديد ، عندما يبدأ فقدان البروتينات الجزيئية الكبيرة. تعتبر انتقائية البروتينية ميزة تشخيصية وإنذارية مهمة.

يمكن أن تكون البيلة البروتينية الكلوية:

• عضوي و
• وظيفية (فسيولوجية).

بروتينية كلوية عضوية

تحدث البيلة البروتينية الكلوية العضوية مع تلف عضوي في النيفرون. اعتمادًا على آلية الحدوث السائدة ، يمكن تمييز أنواع معينة من بروتينية عضوية.

بيلة بروتينية كبيبية

البول البروتيني الكبيبي - بسبب تلف المرشح الكبيبي ، يحدث مع التهاب كبيبات الكلى واعتلال الكلية المرتبط بأمراض التمثيل الغذائي أو الأوعية الدموية. (التهاب كبيبات الكلى ، ارتفاع ضغط الدم ، العوامل المعدية والحساسية ، عدم المعاوضة القلبية)

بروتينية أنبوبي

بيلة بروتينية أنبوبية - ترتبط بعدم قدرة الأنابيب على إعادة امتصاص بروتينات البلازما ذات الوزن الجزيئي المنخفض التي مرت عبر مرشح كُبيبي غير متغير. (الداء النشواني ، النخر الأنبوبي الحاد ، التهاب الكلية الخلالي ، متلازمة فانكوني)

بيلة بروتينية سابقة للكلية

بيلة بروتينية سابقة (مفرطة) - تتطور في وجود تركيز بلازما مرتفع بشكل غير عادي لبروتين منخفض الوزن الجزيئي ، يتم ترشيحه بواسطة الكبيبات الطبيعية بكمية تتجاوز القدرة الفسيولوجية للأنابيب على إعادة الامتصاص. (المايلوما المتعددة ، نخر الأنسجة العضلية ، انحلال الدم في كرات الدم الحمراء)

بيلة بروتينية كلوية وظيفية

لا ترتبط البيلة البروتينية الكلوية الوظيفية بأمراض الكلى ولا تتطلب العلاج.

تشمل البِيلَة البروتينية الوظيفية:

• مسيرة
• عاطفي
• البرد،
• تسمم،
• orthostatic (فقط عند الأطفال وفقط في وضع الوقوف).

بيلة بروتينية خارج الكلية (ما بعد الكلية)

مع البيلة البروتينية الخارجية (ما بعد الكلى) ، يمكن للبروتين أن يدخل البول من المسالك البولية والتناسلية (مع التهاب القولون والتهاب المهبل - مع البول الذي تم جمعه بشكل غير صحيح). في هذه الحالة ، هذا ليس أكثر من مزيج من الإفرازات الالتهابية.

لا تتجاوز البيلة البروتينية خارج الكلية عادةً 1 جرام / يوم وغالبًا ما تكون عابرة.

يتم المساعدة في تشخيص البيلة البروتينية الخارجية من خلال اختبار ثلاثة أكواب وفحص المسالك البولية.

تحدث البيلة البروتينية التالية للكلية مع التهاب المثانة والتهاب الإحليل.

طرق تحديد البروتين في البول

الشرط الأساسي لإجراء دراسات على وجود البروتين هو الشفافية المطلقة في البول.

عينات الجودة

عينة مع حمض السلفوساليسيليك

يُسكب 3-4 مل من البول المصفى في أنبوبي اختبار. أضف 6-8 قطرات من محلول 20٪ من حمض السلفوساليسيليك إلى أنبوب اختبار تجريبي. الأنبوب الثاني هو التحكم. على خلفية مظلمة ، قارن أنبوب التحكم بالأنبوب التجريبي. في وجود البروتين في عينات البول ، يظهر عكارة براق.

تظهر النتيجة على النحو التالي:

• رد الفعل إيجابي ضعيف (+) ،
• موجب (++) ،
• حاد موجب (+++).

العينة حساسة للغاية.

يمكنك أيضًا استخدام اختبار جاف ، عند إضافة بضع بلورات من حمض السلفوساليسيليك أو ورق ترشيح منقوع مسبقًا بمحلول من هذا الحمض إلى عدة مليلتر من البول.

نتائج إيجابية كاذبةقد يكون بسبب تناول مستحضرات اليود وأدوية السلفا والجرعات الكبيرة من البنسلين ووجود تركيزات عالية من حمض البوليك في البول.

اختبار حمض النيتريك (اختبار جيلر)

يُسكب 1-2 مل من محلول 50٪ من حمض النيتريك في أنبوب اختبار ، ثم توضع كمية متساوية من البول على الحمض. في وجود البروتين تظهر حلقة بيضاء على السطح الفاصل بين سائلين. في بعض الأحيان تتشكل حلقة أرجوانية ضاربة إلى الحمرة فوق الحد الفاصل بين السوائل بقليل من وجود البول. حلقة اليورات ، على عكس حلقة البروتين ، تذوب مع تسخين طفيف.

عينة مشرقة

لا يتطلب اختبار الغليان الساطع واختبارات فحص البيلة البروتينية (العينات اللونية الجافة) أي كواشف تقريبًا.

عندما يتم غليان البول المحتوي على البروتين ، فإنه يتحول إلى رواسب عكرة أو رقائق لا تذوب في حمض الأسيتيك بنسبة 6٪ ، على عكس أملاح الفوسفات. تعتمد اختبارات الفحص على قدرة البروتين (الألبومين) على تغيير لون الورق المطلي بمؤشر (عادة أزرق بروموفينول) ومخزن مؤقت. العلاقة المباشرة بين كثافة لون ورقة المؤشر (البوفان ، ألبوتست - جمهورية التشيك ؛ لابستيكس ، مولتيستيكس - الولايات المتحدة الأمريكية ؛ كومبورتست - ألمانيا) وكمية البروتين تجعل من الممكن تقدير كمية البروتين تقريبًا. ومع ذلك ، فإن اختبارات الفحص المستخدمة حاليًا لا تخلو من العيوب. على وجه الخصوص ، لا يكتشف البروموفينول الأزرق بروتين بينس جونز.

الطرق الكمية

طريقة براندبرج-روبرتس-ستولنيكوف

تعتمد الطريقة على عينة نوعية بحمض النيتريك. تم وصف مسار الاختبار أعلاه. يشير ظهور حلقة رفيعة عند حدود سائلين بين الدقيقتين الثانية والثالثة بعد وضع الطبقات إلى وجود 0.033 جم / لتر من البروتين في البول (يتم التعبير عن تركيز البروتين في البول عادةً في جزء في المليون ، أي بالجرام لكل لتر ). إذا ظهرت الحلقة قبل دقيقتين ، يجب تخفيف البول بالماء. يتم تحديد مثل هذا التخفيف للبول بحيث تظهر الحلقة في الدقيقة 2-3 عندما يتم وضعها على حمض النيتريك. تعتمد درجة التخفيف على عرض الحلقة وانضغاطها ووقت ظهورها.

يتم حساب تركيز البروتين بضرب 0.033 جم / لتر في درجة تمييع البول (الجدول 8).

تتميز طريقة تخفيف روبرتس-ستولنيكوف بعدد من العيوب: فهي ذاتية ، وتستغرق وقتًا طويلاً ، وتقل دقة تحديد تركيز البروتين كلما تم تخفيف البول.

الأكثر ملاءمة ودقة هي طرق قياس نفيلومتر وبيوريت.

طريقة Nephelometric

يعتمد على خاصية البروتين لإعطاء التعكر بحمض السلفوساليسيليك ، الذي تتناسب شدته مع تركيز البروتين. يُسكب 1.25 مل من البول المصفى في أنبوب اختبار متدرج ويضاف محلول 3٪ من حمض السلفوساليسيليك إلى حجم 5 مل ، مخلوطًا جيدًا. بعد 5 دقائق ، يقاس الانقراض على FEK-M (أو أي مقياس ضوئي آخر) بطول موجة 590-650 نانومتر (مرشح الضوء البرتقالي أو الأحمر) مقابل عنصر التحكم في كفيت بسمك طبقة 0.5 سم. للتحكم ، استخدم 1.25 مل من البول المصفى (نفس الشيء) ، والذي يضاف إليه محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بحجم 5 مل.

تم بناء منحنى المعايرة مبدئيًا اعتمادًا على قيمة الانقراض على تركيز البروتين. يستخدم محلول الألبومين القياسي (من مصل الإنسان أو البقري) لإعداد تركيزات مختلفة من البروتين. أكمل ورقة العمل.

طريقة بيوريت

يعتمد على قدرة البروتين على إعطاء مركب بيوريت بنفسجي مع كبريتات النحاس والقلويات الكاوية ، وتتناسب كثافة لونه بشكل مباشر مع كمية البروتين. إلى 2 مل من البول ، أضف 2 مل من محلول حمض ثلاثي كلورو الخليك لترسيب البروتين وجهاز الطرد المركزي. يتم التخلص من المادة الطافية. أضف إلى الرواسب (البروتين) 4 مل من محلول هيدروكسيد الصوديوم بنسبة 3٪ و 0.1 مل من محلول كبريتات النحاس بنسبة 20٪ ، وحركه وطرده المركزي. يتم قياس الطاف البنفسجي بطول موجة 540 نانومتر (مرشح الضوء الأخضر) ضد الماء المقطر في كفيت بسمك طبقة 1.0 سم. يتم تحديد تركيز البروتين من جدول تم الحصول عليه تجريبياً (تم بناء منحنى المعايرة كما في السابق طريقة).

اختبار تقويم العظام

يشار إلى البيلة البروتينية الانتصابية المشتبه بها والتهاب الكلية. بعد التفريغ الكامل للمثانة ، يحتفظ المريض بوضع أفقي لمدة ساعتين ، ثم يمر دون القيام بجزء واحد (تحكم) من البول. على مدار الساعتين التاليتين ، يمشي المريض باستمرار ، ويحافظ على موضع الحد الأقصى من قعس أسفل الظهر (يحمل عصا خلف أسفل الظهر) ، وبعد ذلك يمر الجزء الثاني من البول. في كلا الجزأين من البول ، يتم تحديد تركيز البروتين ومحتوى البروتين بالجرام ، وفي حالة التهاب الكلية ، يتم تحديد عدد خلايا الدم الحمراء في 1 مل. مع البيلة البروتينية الانتصابية ، تم الكشف عن بروتينية أو زيادة بمقدار 2-3 أضعاف في محتوى البروتين الأولي بالجرام في الوجبة الثانية. إن ظهور بيلة دموية ، غالبًا بالاشتراك مع بيلة بروتينية في الجزء الثاني ، هو سمة من سمات التهاب الكلية.

تحديد البروتينات البولية بنس جونز

بروتينات بنس جونز عبارة عن بروتينات بارابروتينات منخفضة الوزن الجزيئي قابلة للتحلل بالحرارة (الوزن الجزيئي النسبي 20.000-45.000) توجد بشكل رئيسي في المايلوما المتعددة وغلوبولين الدم في والدنستروم. هم سلاسل L الخفيفة من الغلوبولين المناعي. نظرًا لوزنها الجزيئي الصغير ، تمر سلاسل L بسهولة من الدم عبر مرشح كلوي سليم إلى البول ويمكن تحديدها هناك باستخدام تفاعل الترسيب الحراري. يُنصح بإجراء الدراسة فقط باختبار إيجابي باستخدام حمض السلفوساليسيليك. يتم التعريف على النحو التالي. إلى 10 مل من البول ، أضف 3-4 قطرات من محلول 10 ٪ من حمض الأسيتيك و 2 مل من محلول كلوريد الصوديوم المشبع ، وقم بالتسخين برفق في حمام مائي ، وزيادة درجة الحرارة تدريجياً. إذا كانت هناك بروتينات بنس جونز في البول ، فعند درجة حرارة 45-60 درجة مئوية تظهر عكارة منتشرة أو تكون رواسب بيضاء كثيفة. عند التسخين الإضافي إلى الغليان ، يذوب الراسب ، ويظهر مرة أخرى عند التبريد. هذه العينة ليست حساسة بدرجة كافية ويجب فحصها عن طريق الرحلان الكهربي والمناعة.

26.02.2009

كوريلياك O.A. ، دكتوراه.

عادة ، يُفرز البروتين في البول بكمية صغيرة نسبيًا ، لا تزيد عادة عن 100-150 مجم / يوم.

إدرار البول اليومي في الشخص السليم هو 1000-1500 مل / يوم ؛ وبالتالي ، فإن تركيز البروتين في الظروف الفسيولوجية هو 8-10 مجم / ديسيلتر (0.08-0.1 جم / لتر).

يتم تمثيل البروتين الكلي للبول بثلاثة أجزاء رئيسية - الألبومين والبروتينات المخاطية والجلوبيولين.

البول الزلال هو ذلك الجزء من ألبومين المصل الذي تم ترشيحه في الكبيبات ولم يتم امتصاصه في الأنابيب الكلوية ؛ يكون إفراز الألبومين البولي العادي أقل من 30 ملغ / يوم. مصدر رئيسي آخر للبروتين في البول هو الأنابيب الكلوية ، وخاصة الجزء البعيد من الأنابيب. تفرز هذه الأنابيب ثلثي إجمالي البروتين البولي. حوالي 50٪ من هذه الكمية يمثلها بروتين تام-هورسفال سكري ، الذي تفرزه ظهارة الأنابيب البعيدة ويلعب دورًا مهمًا في تكوين حصوات المسالك البولية. توجد بروتينات أخرى في البول بكميات صغيرة وتأتي من المرشح من خلال المرشح الكلوي لبروتينات البلازما منخفضة الوزن الجزيئي التي لا يتم إعادة امتصاصها في الأنابيب الكلوية ، و microglobulins من الظهارة الأنبوبية الكلوية (RTE) ، والإفرازات المهبلية والبروستاتية.

تعتبر البيلة البروتينية ، أي زيادة محتوى البروتين في البول ، أحد أهم الأعراض التي تعكس تلف الكلى. ومع ذلك ، يمكن أيضًا أن يصاحب عدد من الحالات الأخرى بيلة بروتينية. لذلك ، هناك مجموعتان رئيسيتان من البيلة البروتينية: البيلة البروتينية الكلوية (الحقيقية) والبيلة البروتينية الخارجية (الزائفة).

في البيلة البروتينية الكلوية ، يدخل البروتين إلى البول مباشرة من الدم بسبب زيادة نفاذية المرشح الكبيبي. غالبًا ما توجد البيلة البروتينية الكلوية في التهاب كبيبات الكلى ، والتهاب الكلى ، والتهاب الحويضة والكلية ، وتصلب الكلى ، والداء النشواني في الكلى ، وأشكال مختلفة من اعتلال الكلية ، مثل اعتلال الكلية أثناء الحمل ، والحمى ، وارتفاع ضغط الدم ، إلخ. يمكن أيضًا العثور على البيلة البروتينية في الأشخاص الأصحاء بعد مجهود بدني شديد وانخفاض حرارة الجسم والضغط النفسي. في الأطفال حديثي الولادة في الأسابيع الأولى من الحياة ، لوحظ وجود بيلة بروتينية فسيولوجية ، ومع حدوث وهن عند الأطفال والمراهقين ، جنبًا إلى جنب مع النمو السريع في سن 7-18 عامًا ، يمكن حدوث بيلة بروتينية انتصابية (في الوضع المستقيم للجسم).

مع البيلة البروتينية الزائفة (خارج الكلية) ، يكون مصدر البروتين في البول هو مزيج من الكريات البيض ، وخلايا الدم الحمراء ، وخلايا الظهارة البولية في ظهارة المسالك البولية. يؤدي تفكك هذه العناصر ، خاصةً في التفاعل القلوي للبول ، إلى دخول البروتين إلى البول ، الذي مر بالفعل بالمرشح الكلوي. تعطي درجة عالية من البيلة البروتينية الزائفة بشكل خاص خليطًا من الدم في البول ، مع بيلة دموية غزيرة يمكن أن تصل إلى 30 جم / لتر أو أكثر. الأمراض التي قد تصاحبها بروتينية خارج الكلية - تحص بولي ، سل الكلى ، أورام الكلى أو المسالك البولية ، التهاب المثانة ، التهاب الحويضة ، التهاب البروستات ، التهاب الإحليل ، التهاب الفرج.

يشمل التصنيف السريري بيلة بروتينية خفيفة (أقل من 0.5 جم / يوم) ، معتدلة (0.5 إلى 4 جم / يوم) ، أو شديدة (أكبر من 4 جم / يوم).

يعاني معظم المرضى الذين يعانون من أمراض الكلى مثل التهاب كبيبات الكلى الحاد أو التهاب الحويضة والكلية من بيلة بروتينية خفيفة ، لكن المرضى الذين يعانون من المتلازمة الكلوية يفرزون عادة أكثر من 4 غرام من البروتين يوميًا في البول.

يتم استخدام مجموعة واسعة من الطرق لتحديد كمية البروتين ، على وجه الخصوص ، طريقة Brandberg-Roberts-Stolnikov الموحدة ، طريقة biuret ، طريقة استخدام حمض السلفوساليسيليك ، طرق استخدام صبغة Coomassie الزرقاء ، صبغة pyrogallol الحمراء ، إلخ.

أدى استخدام طرق مختلفة لتحديد البروتين في البول إلى ارتباك خطير في تفسير حدود المحتوى الطبيعي للبروتين في البول. نظرًا لاستخدام طريقتين غالبًا في المختبرات - باستخدام حمض السلفوساليسيليك وصبغة بيروجالول الحمراء ، فسننظر في مشكلة صحة حدود المعايير الخاصة بهم. من موضع طريقة السلفوساليسيليك في البول الطبيعي ، يجب ألا يتجاوز محتوى البروتين 0.03 جم / لتر ، من موضع طريقة بيروجالول - 0.1 جم / لتر! الخلافات ثلاثية!

ترجع القيم المنخفضة لمعيار تركيز البروتينات في البول عند استخدام حمض السلفوساليسيليك إلى النقاط التالية:

• منحنى المعايرة مبني على محلول مائي من الألبومين. يختلف البول في تركيبته اختلافًا كبيرًا عن الماء: الأس الهيدروجيني والأملاح والمركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض (الكرياتينين واليوريا وما إلى ذلك). نتيجة لذلك ، وفقًا لـ Altshuler و Rakov و Tkachev ، يمكن أن يكون الخطأ في تحديد البروتين في البول 3 أضعاف أو أكثر! أولئك. يمكن الحصول على نتائج التحديد الصحيحة فقط في الحالات التي يكون فيها البول ذو جاذبية نوعية منخفضة جدًا وقريبًا من الماء في التركيب ودرجة الحموضة ؛
• حساسية أعلى لطريقة السلفوساليسيليك للألبومين مقارنة بالبروتينات الأخرى (بينما ، كما ذكر أعلاه ، لا يتجاوز الألبومين في عينات البول العادية 30٪ من إجمالي بروتين البول) ؛
• إذا تم تحويل الرقم الهيدروجيني للبول إلى الجانب القلوي ، يتم تحييد حمض السلفوساليسيليك ، وهو أيضًا سبب التقليل من نتائج تحديد البروتين ؛
• يخضع معدل ترسيب الرواسب لتغير كبير - عند تركيزات منخفضة من البروتين ، يتباطأ الترسيب ، ويؤدي التوقف المبكر للتفاعل إلى التقليل من النتيجة ؛
• معدل تفاعل الترسيب يعتمد بشكل أساسي على تقليب خليط التفاعل. عند وجود تركيزات عالية من البروتين ، يمكن أن يؤدي الاهتزاز القوي للأنبوب إلى تكوين رقائق كبيرة واستقرارها السريع.

جميع الميزات المذكورة أعلاه للطريقة تؤدي إلى تقليل كبير في تقدير تركيز البروتين المحدد في البول. تعتمد درجة الاستخفاف بشكل كبير على تكوين عينة بول معينة. نظرًا لأن طريقة حمض السلفوساليسيليك تعطي تركيزات بروتينية أقل من الواقع ، فإن الحد الطبيعي لهذه الطريقة البالغ 0.03 جم / لتر يتم التقليل من شأنه أيضًا بنحو ثلاث مرات مقارنة بالبيانات الواردة في الكتب المرجعية الأجنبية حول التشخيصات المخبرية السريرية.

تخلت الغالبية العظمى من المختبرات في الدول الغربية عن استخدام طريقة السلفوساليسيليك لتحديد تركيز البروتين في البول وتستخدم بنشاط طريقة البيروجالول لهذا الغرض. تعتمد طريقة بيروجالول لتحديد تركيز البروتين في البول والسوائل البيولوجية الأخرى على مبدأ القياس الضوئي لقياس الكثافة الضوئية لمركب ملون يتكون من تفاعل جزيئات البروتين مع جزيئات مركب صبغة بيروجالول الأحمر ومركب موليبدات الصوديوم ( مركب Pyrogallol Red-Molybdate).

لماذا توفر طريقة البيروجالول قياسات أكثر دقة لبروتينات البول؟ أولاً ، بسبب زيادة تخفيف عينة البول في خليط التفاعل. إذا كانت نسبة عينة البول / الكاشف في طريقة السلفوساليسيليك هي 1/3 ، فيمكن أن تتراوح في طريقة البيروغالول من 1 / 12.5 إلى 1/60 ، اعتمادًا على متغير الطريقة ، مما يقلل بشكل كبير من تأثير تكوين البول على نتيجة القياس. ثانيًا ، يستمر التفاعل في محلول سكسينات ، أي عند درجة حموضة ثابتة. وأخيرًا ، يمكن القول إن مبدأ الطريقة ذاته أكثر "شفافية". يشكل موليبدات الصوديوم والصبغة الحمراء بيروجالول مركبًا به جزيء بروتين. يؤدي هذا إلى حقيقة أن جزيئات الصبغة في الحالة الحرة ، والتي لا تمتص الضوء بطول موجة 600 نانومتر ، تمتص الضوء مع البروتين. وهكذا ، نقوم بتسمية كل جزيء بروتين بصبغة ، ونتيجة لذلك ، نجد أن التغيير في الكثافة الضوئية لخليط التفاعل بطول موجة يبلغ 600 نانومتر يرتبط ارتباطًا واضحًا بتركيز البروتين في البول. علاوة على ذلك ، نظرًا لأن تقارب اللون الأحمر البيروجالول لكسور البروتين المختلفة هو نفسه تقريبًا ، تسمح لك الطريقة بتحديد إجمالي بروتين البول. لذلك ، فإن الحد الأقصى للقيم الطبيعية لتركيز البروتين في البول هو 0.1 جم / لتر (يشار إليه في جميع الإرشادات الغربية الحديثة للتشخيص السريري والمختبري ، بما في ذلك "الدليل السريري للاختبارات المعملية" ، الذي تم تحريره بواسطة N. Titz) . يتم عرض الخصائص المقارنة لطرق البيروجالول والسلفوساليسيليك لتحديد البروتين في البول في الجدول 1.

في الختام ، أود أن أركز مرة أخرى على حقيقة أنه عندما يتحول المختبر من طريقة السلفوساليسيليك لتحديد البروتين في البول إلى طريقة البيروغالول ، يزداد حد القيم الطبيعية بشكل ملحوظ (من 0.03 جم / لتر إلى 0.1 جم). / لتر!). يجب أن يقوم طاقم المختبر بالتأكيد بإبلاغ الأطباء عن هذا ، لأنه. في هذه الحالة ، لا يمكن تشخيص البيلة البروتينية إلا عندما يتجاوز محتوى البروتين في البول 0.1 جم / لتر.

فهرس.

1. ألتشولر بي يو ، راكوف إس إس ، تكاتشيف ج. // سؤال. عسل. كيمياء. - 2001. - رقم 4. - C.426-438.
2. Kim Yu.V. ، Potekhin O.E. ، Tokar M.I. ، Shibanov A.N. // مختبر. عسل. - 2003. - رقم 6. - ج 94-98.
3. الدليل السريري للاختبارات المعملية ، أد. N. Tesa. - M.- Unimed-press.-2003. - 942 ص.
4. Kozlov A.V. ، Slepysheva V.V. طرق تحديد البروتين في البول: الفرص والآفاق // مجموعة أعمال السابع السنوية. نيفرول SPb. ندوة. - سان بطرسبرج: TNA. - 1999. - C.17-28.
5. Pupkova V.I. ، Pikalov IV ، Khrykina E.N. ، Kharkovskiy A.V. // أخبار "Vector-Best". - 2003. - رقم 4 (30).
6. Chambers R.E. ، Bullock D.G. ، Whicher J.T. // آن. كلين. بيوتشيم. - 1991. - المجلد. 28 (جزء 5). - ص 467-473.
7. طب المختبرات السريرية. إد. بواسطة كينيث د.مكلاتشي. - الطبعة الثانية 2001. - 1993 ص.
8. Eppel GA، Nagy S.، Jenkins M.A.، Tudball R.N.، Daskalakis M.، Balazs NDH، Comper W.D. // عيادة. بيوتشيم. - 2000. - المجلد. 33. - ص 487 - 494.
9. فرانك ج. ، سالفاتي م ، سومر آر جي. تكوين وجهاز فحص البروتين البولي وطريقة استخدام نفس // براءة الاختراع الأمريكية رقم 5326707. - 1994.
10. كابلان آي في ، ليفينسون إس. // عيادة. تشيم. - 1999. - المجلد. 45. - ص 417-419.
11. كاشيف دبليو ، صديقي ن ، دينسر سعادة ، دينسر إيه بي ، هيرش س. // كليفلاند كلين. J. من ميد. - 2003. - المجلد. 70 (6). - ص 535-547.
12. كويربين جي ، تايلور إل ، داتون جي ، مارشال ك ، لو ف ، بوتر جي إم. // عيادة. تشيم. - 2001. - المجلد. 47 - ص 2183 - 2184.
13. Le Bricon T. ، Erlich D. ، Dussaucy M. ، Garnier JP ، Bousquet B. // مقال بالفرنسية. - آن. بيول. كلين. (باريس). - 1998. - المجلد. 56 (6). - ص 719-723.
14. مارشال ت ، ويليامز ك. // عيادة. تشيم. - 2003. - المجلد. 49 (12). - ص 2111 - 2112.
15. بوجيا إم ، نيومان دي جي ، لوت جا ، دي ميلو إل ، كلارك إل ، بروفيت ج إيه ، فريق ت. // كلين. شيم. اكتا. - 2002. - المجلد. 326 (1-2). - ص 177-183.
16. رينجرود كم ، لين جيه. تحليل البول وسوائل الجسم: A ColorText و Atlas // Mosby. - 1995. - ص 52-54.
17. شيبارد دكتوراه في الطب ، Penberthy L.A. // عيادة. تشيم. - 1987. - المجلد. 33- ص 792-795.
18. وليامز كي إم ، مارشال ت. // جيه بيوشيم. بيوفيز. طُرق. - 2001. - المجلد. 47 - ص 197-207.
19. ويليامز كيه إم ، آرثر إس جي ، بوريل جي ، كيلي إف ، فيليبس دي دبليو ، مارشال تي // جي بيوشيم. بيوفيز. طُرق. - 2003. - المجلد. 57 (1). - ص45-55.

تعتمد جميع طرق تحديد البروتين في البول على تخثر البروتين تحت تأثير العوامل الكيميائية أو الحرارية. في وجود البروتين في البول ، تظهر العكارة ، وتعتمد درجتها على كمية البروتين.

أ) اختبارات الجودةتحديد البروتين في البول - إلزامي.

1. عينة مع حمض النيتريك- في أنبوب اختبار يحتوي على 1-2 مل من محلول حمض النيتريك بنسبة 50٪ ، ضعي كمية متساوية من البول بحذر مع محاولة عدم رج السائل. في حالة وجود البروتين في البول ، تظهر حلقة بيضاء عند حدود السائلين ، ويمكن رؤيتها بشكل أفضل على خلفية سوداء.

2. عينة مع حمض سلفاساليسيليك- يسكب 4-5 مل من البول في أنبوب اختبار وتضاف 8-10 قطرات من الكاشف. في حالة وجود البروتين في البول ، قد يحدث التعكر أو التندب ، اعتمادًا على كميته.

3. الاختبار السريع (الاختبار التشخيصي الجاف)- يتم غمر شريط من ورق مؤشر Albufan في بول الاختبار بحيث يتم ترطيب منطقتي المؤشر في وقت واحد (المنطقة العليا لتحديد الرقم الهيدروجيني ، والمنطقة السفلية مخصصة لتحديد البروتين). بعد 2-3 ثوانٍ ، يتم وضع الشريط على لوح زجاجي أبيض. يتم إجراء التقييم بعد 60 ثانية من ترطيب الشريط بالبول ، باستخدام مقياس ألوان مطبوع على العلبة مع شرائط مؤشر.

ب) العينات الكمية- يتم إجراؤه في تلك الأجزاء من البول حيث تم العثور على البروتين أثناء تحديده النوعي ؛ يتم التحديد في المادة الطافية بعد الطرد المركزي

طريقة براندبرج-روبرتس-ستولنيكوف- يتم سكب 1-3 مل من محلول حمض النيتريك بنسبة 50٪ في أنبوب اختبار ويتم وضع نفس الكمية من البول بعناية على طول الجدار. يتم تسجيل الوقت على ساعة توقيت. إذا تم تشكيل الحلقة الموجودة في واجهة السوائل على الفور أو قبل دقيقتين من وضع الطبقات ، يجب تخفيف البول بالماء. بعد ذلك ، يتم إجراء تحديد متكرر للبروتين في البول المخفف. يتم إجراء التخفيف حتى تظهر حلقة بيضاء بين الدقيقتين الثانية والثالثة عند إضافة البول المخفف إلى حمض النيتريك. يتم تحديد كمية البروتين بضرب 0.033 جزء في المليون في درجة التخفيف.

18. تقنية أخذ مسحات للنباتات ، المكورات البنية ، المشعرات ، الفحص الخلوي ، مؤشرات الأداء الرئيسية.

تقنية مسحة فلورا: تؤخذ المادة من قناة عنق الرحم ومن مجرى البول بفرشاة خاصة تحت التحكم البصري. يتم وضع العينة الناتجة على الفور على شريحة زجاجية وسحقها.

تقنية أخذ مسحات للتريكوموناس: أولاً ، يتم أخذ المادة عن طريق كشط الغشاء المخاطي للإحليل (بعد تدليكه الأولي لمدة دقيقة واحدة حول ارتفاق العانة) والجزء الخلفي من المهبل ، ثم يتم مسح الجزء المهبلي من عنق الرحم باستخدام مسحة معقمة مبللة بمحلول ملحي ، تتم إزالة السدادة المخاطية ، في قناة عنق الرحم بعناية حتى عمق لا يزيد عن 1.0-1.5 سم ، يتم إدخال مسبار ويتم أخذ الكشط من الغشاء المخاطي لعنق الرحم.

تقنية مسحة للمكورات البنية: تؤخذ المادة من مجرى البول وغدد بارثولين والممرات المجاورة للإحليل بعد مسحها بقطعة قطن مبللة بملاقط ملحية أو مهبلية أو مسبار خاص. يتم أخذ المادة من المستقيم بملعقة غير حادة. في مرض السيلان المزمن والخشن ، يتم إجراء استفزاز قبل الدراسة لزيادة احتمالية تحديد العامل الممرض.

لا يمكنك أخذ المادة بمسحة قطنية وأثناء الحيض.

تقنية أخذ المسحات للفحص الخلوي: مسحة تؤخذ من سطح عنق الرحم ، المهبل والفرج بملعقة ، من باطن عنق الرحم - بفرشاة إندو. يتم وضع المادة في طبقة رقيقة على زجاج مقشود معالج بشكل خاص ومعالجتها بمركب خاص لمنع الخلايا من الجفاف. يتم صبغ المستحضرات وفقًا لطريقة بابانيكولاو (ما يسمى بمسحة عنق الرحم) ويتم فحصها بالميكروسكوب.

مؤشر Karyopyknotic- النسبة المئوية للخلايا السطحية ذات النوى pycnotic إلى الخلايا ذات النوى الحويصلية (غير pycnotic). مؤشر سعر المستهلك في بداية المرحلة الجرابية من الدورة الشهرية هو 25-30٪ ، بحلول وقت الإباضة 60-70٪ ، في المرحلة الأصفرية ينخفض ​​إلى 25٪.

وهي من أهم علامات أمراض الكلى والمسالك البولية ودوامها. يعد تحديد تركيز البروتين في البول عنصرًا إلزاميًا وهامًا في دراسة البول. يعد اكتشاف وتقدير البيلة البروتينية أمرًا مهمًا ليس فقط في تشخيص العديد من أمراض الكلى الأولية والثانوية ، ولكن تقييم التغيرات في شدة البيلة البروتينية في الديناميات يحمل معلومات حول مسار العملية المرضية وفعالية العلاج. إن اكتشاف البروتين في البول ، حتى بكميات ضئيلة ، يجب أن ينبه لاحتمال وجود أمراض الكلى أو المسالك البولية ويتطلب إعادة التحليل. وتجدر الإشارة بشكل خاص إلى انعدام المعنى في دراسة البول ، وعلى وجه الخصوص ، تحديد بروتين البول دون مراعاة جميع قواعد جمعه.

يمكن تقسيم جميع طرق تحديد البروتين في البول إلى:

• جودة،
• شبه كمي
• كمي.

الأساليب النوعية

الجميع الاختبارات النوعية للبروتين في البولبناءً على قدرة البروتينات على التفسخ تحت تأثير العوامل الفيزيائية والكيميائية المختلفة. في حالة وجود بروتين في عينة بول الاختبار ، يظهر إما عكارة أو تندب.

شروط تحديد البروتين في البول بناءً على تفاعل التخثر:

1. يجب أن يكون البول حامضيًا. يتم تحمض البول القلوي ببضع (2-3) قطرات من حمض الأسيتيك (5-10٪).
2. يجب أن يكون البول صافياً. تتم إزالة العكارة من خلال مرشح ورقي. إذا استمر الضباب ، أضف التلك أو المغنيسيا المحروقة (حوالي 1 ملعقة صغيرة لكل 100 مل من البول) ، رجها ثم صفيها.
3. يجب إجراء العينة النوعية في أنبوبي اختبار ، أحدهما هو أنبوب تحكم.
4. ابحث عن التعكر يجب أن يكون على خلفية سوداء في الضوء المنقول.

تشمل الطرق النوعية لتحديد البروتين في البول ما يلي:

• اختبار الغليان وغيرها.

أظهرت العديد من الدراسات أنه لا يوجد عدد كبير من الطرق المعروفة لتحديد نوعية البروتين في البول يوفر نتائج موثوقة وقابلة للتكاثر. على الرغم من ذلك ، في معظم DLTs في روسيا ، تُستخدم هذه الطرق على نطاق واسع في الفحص - في البول مع تفاعل نوعي إيجابي ، يتم إجراء مزيد من التحديد الكمي للبروتين. من بين التفاعلات النوعية ، يتم استخدام اختبار Geller واختبار حمض السلفوساليسيليك بشكل أكثر شيوعًا ، ولكن يعتبر اختبار حمض السلفوساليسيليك عمومًا الأكثر ملاءمة للكشف عن البيلة البروتينية المرضية. اختبار الغليان غير مستخدم عمليًا حاليًا نظرًا لتعقيده ومدته.

الطرق شبه الكمية

إلى الطرق شبه الكميةترتبط:

• تحديد نسبة البروتين في البول باستخدام شرائط الاختبار التشخيصية.

تعتمد طريقة Brandberg-Roberts-Stolnikov على اختبار حلقة Geller ، لذلك ، بهذه الطريقة ، يتم ملاحظة نفس الأخطاء كما في اختبار Geller.

حاليًا ، تُستخدم شرائط التشخيص بشكل متزايد لتحديد البروتين في البول. غالبًا ما تستخدم صبغة البروموفينول الزرقاء في محلول السترات كمؤشر للتقدير شبه الكمي للبروتين في البول على الشريط. يتم الحكم على محتوى البروتين في البول من خلال شدة اللون الأخضر المزرق الذي يتطور بعد ملامسة منطقة التفاعل مع البول. يتم تقييم النتيجة بصريًا أو باستخدام أجهزة تحليل البول. على الرغم من الشعبية الكبيرة والمزايا الواضحة لطرق الكيمياء الجافة (البساطة وسرعة التحليل) ، فإن طرق تحليل البول بشكل عام وتحديد البروتين بشكل خاص لا تخلو من عيوب خطيرة. أحدها ، مما يؤدي إلى تشويه المعلومات التشخيصية ، هو زيادة حساسية مؤشر البروموفينول الأزرق للألبومين مقارنة بالبروتينات الأخرى. في هذا الصدد ، يتم تكييف شرائط الاختبار بشكل أساسي للكشف عن البيلة البروتينية الكبيبية الانتقائية ، عندما يتم تمثيل كل بروتين البول تقريبًا بواسطة الألبومين. مع تطور التغييرات وانتقال البيلة البروتينية الكبيبية الانتقائية إلى غير انتقائية (ظهور الجلوبيولين في البول) ، يتم التقليل من نتائج تحديد البروتين مقارنة بالقيم الحقيقية. هذه الحقيقة تجعل من المستحيل استخدام هذه الطريقة لتحديد البروتين في البول لتقييم حالة الكلى (المرشح الكبيبي) في الديناميات. مع البيلة البروتينية الأنبوبية ، يتم أيضًا التقليل من نتائج تحديد البروتين. لا يعد اختبار البروتين باستخدام أعواد العمق مؤشرًا موثوقًا به لمستويات منخفضة من البيلة البروتينية (معظم المقاييس المتوفرة حاليًا غير قادرة على اكتشاف البروتين في البول بتركيزات أقل من 0.15 جم / لتر). النتائج السلبية لتحديد البروتين على الشرائط لا تستبعد وجود الجلوبيولين والهيموجلوبين واليوروموكويد وبروتين بينس جونز والبروتينات الأخرى في البول.

رقائق المخاط التي تحتوي على نسبة عالية من البروتينات السكرية (على سبيل المثال ، مع العمليات الالتهابية في المسالك البولية ، البيلة ، البيلة الجرثومية) يمكن أن تستقر على منطقة المؤشر من الشريط وتؤدي إلى نتائج إيجابية خاطئة. قد ترتبط النتائج الإيجابية الكاذبة أيضًا بتركيزات عالية من اليوريا. يمكن أن يؤدي ضعف الإضاءة وسوء إدراك الألوان إلى نتائج غير دقيقة.

في هذا الصدد ، يجب أن يقتصر استخدام شرائط التشخيص على إجراءات الفحص ، ويجب اعتبار النتائج التي يتم الحصول عليها بمساعدتهم كمؤشر فقط.

الطرق الكمية

صحيح التحديد الكمي للبروتين في البولفي بعض الحالات اتضح أنها مهمة صعبة. يتم تحديد صعوبات حلها من خلال عدد من العوامل التالية:

• محتوى منخفض من البروتين في بول الشخص السليم ، غالبًا عند عتبة حساسية معظم الطرق المعروفة ؛
• وجود العديد من المركبات في البول التي يمكن أن تتداخل مع مسار التفاعلات الكيميائية ؛
• تقلبات كبيرة في محتوى وتكوين بروتينات البول في أمراض مختلفة ، مما يجعل من الصعب اختيار مادة معايرة مناسبة.

في المختبرات السريرية ، يتم استخدام ما يسمى بالطرق "الروتينية" لتحديد البروتين في البول في الغالب ، ولكنها لا تقدم دائمًا نتائج مرضية.

من وجهة نظر محلل يعمل في المختبر ، فإن الطريقة المصممة لقياس كمية البروتين في البول يجب أن تفي بالمتطلبات التالية:

• لها علاقة خطية بين امتصاص المركب المتكون أثناء التفاعل الكيميائي ومحتوى البروتين في العينة في نطاق واسع من التركيزات ، مما يسمح بتجنب عمليات إضافية عند تحضير العينة للبحث ؛
• يجب أن يكون بسيطًا ، ولا يتطلب مؤهلاً عاليًا من المؤدي ، ويتم إجراؤه بعدد صغير من العمليات ؛
• تتمتع بحساسية عالية وموثوقية تحليلية عند استخدام كميات صغيرة من مادة الاختبار ؛
• مقاومة العوامل المختلفة (التقلبات في تكوين العينة ، ووجود الأدوية ، وما إلى ذلك) ؛
• لها تكلفة مقبولة ؛
• أن تكون قابلة للتكيف بسهولة مع أجهزة التحليل الذاتي ؛
• يجب ألا تعتمد نتيجة التحديد على تركيبة البروتين لعينة البول قيد الدراسة.

لا يمكن لأي من الطرق المعروفة حاليًا لتحديد كمية البروتين في البول الادعاء بأنها "المعيار الذهبي".

يمكن تقسيم الطرق الكمية لتحديد البروتين في البول إلى قياس التعكر والقياس اللوني.

طرق قياس التعكر

تشمل طرق قياس التعكر ما يلي:

• تحديد البروتين بحمض السلفوساليسيليك (SSK) ،
• تحديد البروتين بحمض ثلاثي كلورو الخليك (TCA) ،
• تحديد البروتين مع كلوريد البنزيثونيوم.

تعتمد طرق قياس التعكر على انخفاض قابلية ذوبان بروتينات البول بسبب تكوين معلق للجسيمات المعلقة تحت تأثير عوامل الترسيب. يتم الحكم على محتوى البروتين في عينة الاختبار إما من خلال شدة تشتت الضوء ، التي يتم تحديدها من خلال عدد جزيئات تشتت الضوء (طريقة التحليل nephelometric) ، أو من خلال إضعاف تدفق الضوء بواسطة التعليق الناتج (طريقة التحليل التعكر ).

تعتمد كمية تشتت الضوء في طرق الترسيب للكشف عن البروتين في البول على العديد من العوامل: معدل خلط الكواشف ، ودرجة حرارة خليط التفاعل ، وقيمة الأس الهيدروجيني للوسط ، ووجود مركبات غريبة ، وطرق القياس الضوئي. تساهم المراقبة الدقيقة لظروف التفاعل في تكوين معلق ثابت بحجم جسيم ثابت والحصول على نتائج قابلة للتكرار نسبيًا.

تتداخل بعض الأدوية مع نتائج طرق قياس التعكر لتحديد البروتين في البول ، مما يؤدي إلى ما يسمى بنتائج "إيجابية كاذبة" أو "سلبية كاذبة". وتشمل هذه بعض المضادات الحيوية (بنزيل بنسلين ، كلوكساسيللين ، وما إلى ذلك) ، والمواد المشعة المحتوية على اليود ، ومستحضرات السلفانيلاميد.

يصعب توحيد طرق قياس التعكر وغالبًا ما تؤدي إلى نتائج خاطئة ، ولكن على الرغم من ذلك ، فهي تُستخدم حاليًا على نطاق واسع في المختبرات بسبب التكلفة المنخفضة وتوافر الكواشف. الطريقة الأكثر استخدامًا في روسيا هي تحديد البروتين بحمض السلفوساليسيليك.

طرق القياس اللوني

الأكثر حساسية ودقة هي طرق القياس اللوني لتحديد بروتين البول الكلي ، بناءً على تفاعلات لونية محددة للبروتينات.

وتشمل هذه:

1. تفاعل بيوريت ،
2. طريقة لوري
3. طرق تعتمد على قدرة الأصباغ المختلفة على تكوين مجمعات بالبروتينات:
   • Ponceau S (Ponceau S) ،
   • كوماسي بريليانت بلو (كوماسي بريليانت بلو)
   • أحمر بيروجالول (أحمر بيروجالول).

من وجهة نظر المؤدي ، في العمل اليومي للمختبر مع تدفق كبير للأبحاث ، فإن طريقة biuret غير مريحة بسبب العدد الكبير من العمليات. في الوقت نفسه ، تتميز الطريقة بموثوقية تحليلية عالية ، مما يسمح بتحديد البروتين في نطاق واسع من التركيزات واكتشاف الألبومين والغلوبيولين والبروتينات ذات الحساسية المماثلة ، ونتيجة لذلك تعتبر طريقة biuret بمثابة مرجع ويوصى به للمقارنة بين الطرق التحليلية الأخرى للكشف عن البروتين في البول. يفضل إجراء طريقة بيوريت لتحديد البروتين في البول في المعامل التي تخدم أقسام أمراض الكلى واستخدامها في الحالات التي تكون فيها نتائج التحديد باستخدام طرق أخرى مشكوك فيها ، وكذلك لتحديد مقدار فقد البروتين اليومي في مرضى الكلى.

تجمع طريقة Lowry ، التي تتميز بحساسية أعلى من طريقة biuret ، بين تفاعل biuret وتفاعل Folin للأحماض الأمينية التيروزين والتريبتوفان في جزيء البروتين. على الرغم من حساسيتها العالية ، لا تقدم هذه الطريقة دائمًا نتائج موثوقة في تحديد محتوى البروتين في البول. والسبب في ذلك هو التفاعل غير المحدد لكاشف Folin مع مكونات البول غير البروتينية (غالبًا الأحماض الأمينية ، وحمض البوليك ، والكربوهيدرات). يسمح فصل هذه المكونات البولية وغيرها عن طريق غسيل الكلى أو ترسيب البروتين باستخدام هذه الطريقة بنجاح في التحديد الكمي للبروتين في البول. بعض الأدوية - الساليسيلات ، الكلوربرومازين ، التتراسكلين يمكن أن تؤثر على هذه الطريقة وتشوه نتائج الدراسة.

إن الحساسية الكافية ، والتكاثر الجيد ، وسهولة تحديد البروتين عن طريق ربط الصبغة تجعل هذه الطرق واعدة ، لكن التكلفة العالية للكواشف تعيق استخدامها على نطاق أوسع في المختبرات. في الوقت الحاضر ، أصبحت طريقة البيروجالول الأحمر أكثر انتشارًا في روسيا.

عند فحص مستوى البيلة البروتينية ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن الطرق المختلفة لتحديد بروتينية لها حساسية وخصوصية مختلفة للعديد من بروتينات البول.

بروتينية = 0.4799 ب + 0.5230 لتر ؛
بروتينية = 1.5484 ب - 0.4825 ج ؛
بروتينية = 0.2167 ج + 0.7579 لتر ؛
بروتينية = 1.0748 ف - 0.0986 ب ؛
بروتينية = 1.0104 ف - 0.0289 س ؛
بروتينية = 0.8959 ف + 0.0845 لتر ؛

أين:
ب- نتيجة القياس باستخدام Coomassie G-250 ؛
إل- نتيجة القياس باستخدام كاشف لوري ؛
ص- نتيجة القياس باستخدام موليبدات البيروجالول ؛
س- نتيجة القياس بحمض السلفوساليسيليك.

مع الأخذ في الاعتبار التقلبات الواضحة في مستوى البيلة البروتينية في أوقات مختلفة من اليوم ، وكذلك اعتماد تركيز البروتين في البول على إدرار البول ، ومحتواه المختلف في الأجزاء الفردية من البول ، فمن المعتاد الآن تقييم شدة بروتينية في أمراض الكلى عن طريق الفقد اليومي للبروتين في البول ، أي لتحديد ما يسمى بروتينية يومية. يتم التعبير عنه بالجرام / اليوم.

إذا كان من المستحيل جمع البول يوميًا ، فمن المستحسن تحديد تركيز البروتين والكرياتينين في جزء واحد من البول. نظرًا لأن معدل إطلاق الكرياتينين أثناء النهار ثابت تمامًا ولا يعتمد على التغيرات في معدل التبول ، فإن نسبة تركيز البروتين إلى تركيز الكرياتينين ثابتة. ترتبط هذه النسبة جيدًا بإفراز البروتين يوميًا ، وبالتالي يمكن استخدامها لتقييم شدة البيلة البروتينية. عادة ، يجب أن تكون نسبة البروتين / الكرياتينين أقل من 0.2. يتم قياس البروتين والكرياتينين بالجرام / لتر. من المزايا المهمة لطريقة تقييم شدة البيلة البروتينية بنسبة البروتين والكرياتينين القضاء التام على الأخطاء المرتبطة بالاستحالة أو التجميع غير الكامل للبول اليومي.

المؤلفات:

• O. V. Novoselova، M. B. Pyatigorskaya، Yu. E. Mikhailov، "Clinical features of theection of proteinuria"، Handbook of the head of CDL، No. 1، January 2007
• كوزلوف ، "بروتينية: طرق للكشف عنها" ، محاضرة ، سان بطرسبرج ، SPbMAPO ، 2000
• إيمانويل ، التشخيص المخبري لأمراض الكلى. متلازمة المسالك البولية ، - كتيب رئيس CDL ، العدد 12 ، ديسمبر 2006.
• في و. بوبكوفا ، إل. براسولوفا - تحديد البروتين في البول والسائل النخاعي. كولتسوفو ، 2007
• كتيب طرق البحث في المختبرات السريرية. إد. إي. أ. كوست. موسكو ، "الطب" ، 1975

توجد أيضًا كمية صغيرة من البروتين في البول اليومي لدى الأفراد الأصحاء تمامًا ، ومع ذلك ، لا يتم اكتشاف هذه التركيزات الصغيرة في أجزاء مفردة بالطرق المستخدمة حاليًا. ما يقرب من 70 ٪ من بروتينات البول البشرية الصحية هي uromucoid ، وهو بروتين منتج من أنسجة الكلى. وبالتالي ، فإن نسبة البروتين الكبيبي في بول الأشخاص الأصحاء لا تكاد تذكر ، وعادة ما تكون نسبة البروتين في البول 50-150 مجم / يوم ، مع تطابق معظم بروتينات البول مع تلك الموجودة في مصل الدم.

من المعتاد التمييز بين الأشكال التالية من بروتينية اعتمادًا على مكان حدوثها: ما قبل الكلى ، المرتبط بزيادة انهيار بروتين الأنسجة ، وانحلال الدم الواضح ؛ كلوي ، بسبب أمراض الكلى ، والتي يمكن تقسيمها إلى أنبوبي وكبيبي ؛ بعد الكلى ، يرتبط بأمراض المسالك البولية وغالبًا ما يكون بسبب النضح الالتهابي.

اعتمادًا على مدة الوجود ، يتم عزل بروتينية دائمة ، موجودة لعدة أسابيع وحتى سنوات ، وعابرة ، تظهر بشكل دوري ، وأحيانًا حتى في حالة عدم وجود أمراض الكلى ، على سبيل المثال ، مع الحمى والتسمم الشديد. يُنصح بالتمييز بين تنوع البروتينات: مع فقدان بروتين يومي يصل إلى 1 جم - معتدل ، من 1 إلى 3 جم - متوسط ​​وأكثر من 3 جم - واضح.

يشير اكتشاف البروتينات ذات الوزن الجزيئي الكبير نسبيًا في البول إلى عدم انتقائية المرشح الكلوي وتلفه الواضح. في هذه الحالات ، يتحدث المرء عن انتقائية منخفضة للبروتينية. لذلك ، في الوقت الحاضر ، أصبح تعريف أجزاء البروتين في البول واسع الانتشار. أدق طرق الرحلان الكهربائي في النشا وهلام بولي أكريلاميد.
وفقًا للنتائج التي تم الحصول عليها بهذه الطرق ، من الممكن الحكم على انتقائية بروتينية.

تعتمد معظم الطرق النوعية والكمية لتحديد البروتين في البول على تخثره في حجم البول أو في واجهة الوسط (البول والحمض) ؛ إذا كانت هناك طريقة لقياس شدة التخثر ، فإن العينة تصبح كمية.

اختبار موحد بحمض السلفوساليسيليك:

الكاشف المطلوب:

20٪ محلول حمض السلفوساليسيليك.

تقدم البحث:

يُسكب 3 مل من البول المصفى في أنبوبين. أضف 6-8 قطرات من الكاشف إلى أنبوب الاختبار. على خلفية مظلمة ، قارن أنبوب التحكم بالأنبوب التجريبي. تشير العكارة في أنبوب الاختبار إلى وجود البروتين ، وتعتبر العينة إيجابية.

إذا كان تفاعل البول قلويًا ، فقبل الدراسة يتم تحمضه بـ 2-3 قطرات من محلول 10 ٪ من حمض الأسيتيك.

طريقة براندبرج-روبرتس-ستولنيكوف الموحدة:

تعتمد الطريقة على اختبار Heller ring ، والذي يتكون من حقيقة أنه عند حدود حمض النيتريك والبول ، في وجود البروتين ، يحدث تخثره وتظهر حلقة بيضاء.

الكاشف المطلوب:

محلول 30٪ من حمض النيتريك (كثافة نسبية 1.2) أو كاشف لاريونوفا.
تحضير كاشف Larionova: يتم إذابة 20-30 جم من كلوريد الصوديوم عن طريق التسخين في 100 مل من الماء المقطر ، ويُترك ليبرد ، ويتم ترشيحه. يضاف إلى 99 مل من المرشح 1 مل من حمض النيتريك المركز.

تقدم البحث:

يتم سكب 1-2 مل من حمض النيتريك (أو كاشف Larionova) في أنبوب الاختبار ويتم وضع نفس الكمية من البول المصفى بعناية على طول جدار أنبوب الاختبار. يشير ظهور حلقة بيضاء رفيعة عند السطح الفاصل بين سائلين بين دقيقتين و 3 دقائق إلى وجود بروتين بتركيز يبلغ حوالي 0.033 جم / لتر. إذا ظهرت الحلقة قبل دقيقتين من وضع الطبقات ، فيجب تخفيف البول بالماء وإجراء طبقات متكررة من البول المخفف بالفعل. يتم تحديد درجة تخفيف البول حسب نوع الحلقة ، أي. عرضه واكتنازه ووقت ظهوره. مع حلقة خيطية ظهرت قبل دقيقتين ، يتم تخفيف البول مرتين ، مع حلقة عريضة - 4 مرات ، مع حلقة مضغوطة - 8 مرات ، إلخ. ثم يتم حساب تركيز البروتين بضرب 0.033 في درجة التخفيف ويعبر عنه بالجرام لكل لتر (جم / لتر).

في بعض الأحيان يتم الحصول على حلقة بيضاء في وجود كميات كبيرة من البول. على عكس حلقة البروتين ، تظهر حلقة اليورات أعلى قليلاً من الحد الفاصل بين السائلين وتذوب بالتسخين اللطيف.

التحديد الكمي للبروتين في البول عن طريق التعكر الناتج عن إضافة حمض السلفوساليسيليك:

مبدأ الطريقة:

تتناسب شدة التعكر أثناء تخثر البروتين بحمض السلفوساليسيليك مع تركيزه.

الكواشف المطلوبة:

1. محلول 3٪ من حمض السلفوساليسيليك.

2. محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪.

3. محلول الألبومين القياسي - محلول 1٪ (محلول 1 مل يحتوي على 10 ملغ من الألبومين): 1 غرام من الألبومين المجفف بالتجميد (من مصل بشري أو بقري) يذوب في كمية صغيرة من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ في دورق بسعة 100 مل ، ثم خفف حتى العلامة بنفس المحلول. يتم تثبيت الكاشف بإضافة 1 مل من محلول 5٪ أزيد الصوديوم (NaN3). عند تخزينه في الثلاجة ، يكون الكاشف جيدًا لمدة شهرين.

معدات خاصة - مقياس الألوان الكهروضوئي.

تقدم البحث:

يضاف 1.25 مل من البول المصفى إلى أنبوب الاختبار ، ويعلوه ما يصل إلى 5 مل بمحلول 3٪ من حمض السلفوساليسيليك المختلط. بعد 5 دقائق ، يتم قياسه على مقياس ضوئي ضوئي بطول موجة 590-650 نانومتر (مرشح الضوء البرتقالي أو الأحمر) مقابل التحكم في كفيت بطول مسار بصري 5 مم. يعمل أنبوب الاختبار كعنصر تحكم ، حيث تمت إضافة 0.9 ٪ من محلول كلوريد الصوديوم إلى 1.25 مل من البول المرشح إلى 5 مل. يتم الحساب وفقًا للرسم البياني للمعايرة ، حيث يتم تحضير التخفيفات من المحلول القياسي ، كما هو موضح في الجدول.

من كل محلول يتم الحصول عليه ، يتم أخذ 1.25 مل ومعالجتها كعينات تجريبية.

يتم الحفاظ على اعتماد الخط المستقيم في بناء الرسم البياني للمعايرة حتى 1 جم / لتر. عند التركيزات الأعلى ، يجب تخفيف العينة وأخذ التخفيف في الاعتبار في الحساب.

يمكن الحصول على نتائج إيجابية كاذبة في وجود عوامل تباين تحتوي على اليود العضوي في البول. لذلك ، لا يمكن استخدام الاختبار في الأشخاص الذين يتناولون مستحضرات اليود ؛ قد تكون النتيجة الإيجابية الكاذبة أيضًا بسبب استخدام أدوية السلفا ، والجرعات الكبيرة من البنسلين والتركيزات العالية من حمض البوليك.

طريقة Biuret:

مبدأ الطريقة:

تشكل روابط الببتيد للبروتين مع أملاح النحاس في القلوية مركبًا بنفسجيًا. يتم ترسيب البروتينات مسبقًا بحمض ثلاثي كلورو أسيتيك.

الكواشف المطلوبة:

1. 10٪ محلول حمض ثلاثي كلورو الخليك.
2. 20٪ محلول نحاسي (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. 3٪ محلول هيدروكسيد الصوديوم.

تقدم البحث:

إلى 5 مل من البول المأخوذ من الكمية اليومية ، أضف 3 مل من محلول حمض ثلاثي كلورو الخليك ، جهاز طرد مركزي إلى حجم ثابت من الرواسب. يتم امتصاص المادة الطافية باستخدام ماصة ، ثم يتم إذابة المادة المترسبة في 5 مل من محلول هيدروكسيد الصوديوم. يضاف 0.25 مل من CuSO4 إلى المحلول ، ويقلب الخليط ويطرد. يتم قياس المادة الطافية ضوئيًا بطول موجة يبلغ 540 نانومتر في كفيت بطول مسار بصري يبلغ 10 ملم مقابل الماء المقطر. يتم حساب تركيز البروتين وفقًا لمنحنى المعايرة ، حيث يتم رسم تركيز البروتين (جم / لتر) على المحور الإحداثي ، ويتم رسم الكثافة الضوئية في وحدات الانقراض على محور الإحداثي. وفقًا للتركيز الذي تم الحصول عليه ، يتم حساب الفقد اليومي للبروتين في البول.

استخدام ورق المؤشر (شرائط):

يمكن الكشف عن البروتين باستخدام ورق المؤشر (الشرائح) ، الذي يتم إنتاجه بواسطة Albuphan ، و Ames (إنجلترا) ، و Albustix ، و Boehringer (ألمانيا) ، و Comburtest ، إلخ.

يعتمد المبدأ على ظاهرة ما يسمى خطأ البروتين لبعض مؤشرات القاعدة الحمضية. جزء المؤشر من الورقة مشرب بعازل رباعي بروموفينول أزرق وسيترات. عندما يبلل الورق ، يذوب المخزن المؤقت ويوفر الرقم الهيدروجيني المناسب لتفاعل المؤشر.

عند 3.0-3.5 ، تتفاعل مجموعات البروتينات الأمينية مع المؤشر وتغير لونها الأصفر في البداية إلى اللون الأزرق المخضر ، وبعد ذلك ، مقارنة بمقياس اللون ، يمكن للمرء تقدير تركيز البروتين تقريبًا في البول قيد الدراسة. الشرط الأساسي للتشغيل الصحيح لشرائط الاختبار هو توفير درجة حموضة في نطاق 3.0-3.5 حتى يستمر التفاعل.

إذا كان الورق على اتصال ببول الاختبار لفترة أطول من التعرض المحدد في التعليمات ، فإن محلول السترات يذوب فيه ، ثم يتفاعل المؤشر مع الرقم الهيدروجيني الحقيقي للبول ، أي يعطي رد فعل إيجابي كاذب. نظرًا لحقيقة أن سعة المخزن المؤقت محدودة ، حتى إذا تم اتباع الإرشادات ، يتم الحصول على نتائج إيجابية خاطئة في عينات البول شديد القلوية (درجة الحموضة> 6.5) ، وفي عينات البول الحمضي جدًا (الرقم الهيدروجيني)
يختلف عدد المجموعات الأمينية المتفاعلة في تكوين البروتينات الفردية ، وبالتالي ، يتفاعل الألبومينات مرتين أكثر بشكل مكثف من نفس الكمية من γ-globulins (بروتين Bence-Jones ، البروتينات البروتينية) ، وبكثافة أكثر بكثير من البروتينات السكرية. ومع ذلك ، مع وجود كمية كبيرة من المخاط الذي يحتوي على نسبة عالية من البروتينات السكرية (مع التهاب المسالك البولية) ، يمكن أن تعطي رقائق المخاط المترسبة على شريط المؤشر نتائج إيجابية خاطئة.

قد تكون حساسية مجموعات الإنتاج الفردية لورق المؤشر ، وكذلك الأنواع الفردية من الورق التي تنتجها نفس الشركة ، مختلفة ، لذلك يجب التعامل مع تقدير كمية البروتين بهذه الطريقة بحذر. لا يمكن تحديد الفقد اليومي للبروتينات في البول باستخدام ورقة المؤشر. وبالتالي ، فإن ورقة المؤشر أدنى من العينات الكيميائية ، وهي في الأساس عينة تحتوي على حمض السلفوساليسيليك ، على الرغم من أنه يجعل من الممكن دراسة سلسلة من العينات بسرعة.

الكشف عن بروتين بنس جونز في البول:

يمكن إفراز بروتين بنس جونز في البول مع الورم النقوي المتعدد ، غلوبولين الدم الكبير في والدنستروم.

يُنصح بإجراء الدراسة فقط باختبار إيجابي باستخدام حمض السلفوساليسيليك. ورقة مؤشر للكشف عن بروتين بنس جونز غير مناسبة.

مبدأ:

بناءً على تفاعل الترسيب الحراري. لا يمكن الاعتماد على الطرق التي تقيم انحلال بروتين بينس جونز عند درجة حرارة 100 درجة مئوية أو إعادة الترسيب عند التبريد اللاحق ، حيث لا تتمتع جميع أجسام بروتين بينس جونز بالخصائص المناسبة. الكشف الأكثر موثوقية عن هذا البروتين هو عن طريق الترسيب عند درجة حرارة 40-60 درجة مئوية ، ولكن حتى في ظل هذه الظروف ، قد لا يحدث الترسيب في البول شديد الحموضة (درجة الحموضة 6.5) ، عند الكثافة النسبية المنخفضة للبول وعند درجة حرارة منخفضة تركيز بروتين بنس جونز.

الكواشف المطلوبة:

2 M خلات المخزن المؤقت الرقم الهيدروجيني 4.9.

تقدم البحث:

يتم خلط البول المصفى بكمية 4 مل مع 1 مل من المخزن المؤقت وتسخينه لمدة 15 دقيقة في حمام مائي عند درجة حرارة 56 درجة مئوية. في وجود بروتينات Bens-Jones ، يظهر راسب واضح في غضون دقيقتين ؛ إذا كان تركيز بروتين Bens-Jones أقل من 3 جم / لتر ، فقد تكون العينة سلبية. من الناحية العملية ، يعد هذا نادرًا للغاية ، نظرًا لأن تركيز بروتين Bens-Jones في البول في الغالب مهم.

مع اليقين التام ، يمكن الكشف عن بروتين بينس جونز عن طريق الدراسة الكهربية المناعية باستخدام مصل معين ضد السلاسل الثقيلة والخفيفة من الغلوبولين المناعي.

تعريف البياض (البروتينات):

البوموز هي منتجات تكسير البروتين ، ويستند مبدأها إلى حقيقة أنها لا تطوي عند الغليان ، ولكنها تعطي تفاعل بيوريت إيجابيًا ويتم تمليحها ببعض الأملاح ، وخاصة كبريتات الأمونيوم وخلات الزنك في بيئة حمضية.

البول الطبيعي لا يحتوي على الألبومين. قد تكون آثار في البول الطبيعي في حالة اختلاط السائل المنوي. في علم الأمراض ، يمكن أن تحدث الألبومات في البول أثناء حالات الحمى ، وعمليات نقل الدم والبلازما ، وارتشاف الإفرازات والارتشاح ، وتسوس الأورام.

الكواشف المطلوبة:

1. محلول كلوريد الصوديوم المشبع.
2. محلول هيدروكسيد الصوديوم المركز.
3. ضعف محلول كبريتات النحاس (عديم اللون تقريبا).

تقدم البحث:

يضاف محلول كلوريد الصوديوم المشبع (1/3 من الحجم) إلى البول المحمض بحمض الأسيتيك ، ويغلى ويتم ترشيح السائل الساخن. تمر الألبومات إلى المرشح ، حيث يتم تحديد وجودها من خلال تفاعل البيوريت. أضف إلى المرشح نصف حجم محلول هيدروكسيد الصوديوم المركز وبضع قطرات من محلول ضعيف من كبريتات النحاس. ينتج عن الاختبار الإيجابي لون أحمر أرجواني.

مع اختبار إيجابي بحمض السلفوساليسيليك ، يتم تسخين البول. إذا اختفى التعكر وظهر مرة أخرى عند التبريد ، فهذا يعني أن البول يحتوي على الألبوم أو جسم بروتين Bence-Jones.